מבנה ומרכיבים עיקריים של מיקרוסקופ פלואורסצנטי
מיקרוסקופ פלואורסצנטי הוא כלי חיוני בציטוכימיה אימונופלואורסנטית. הוא מורכב ממרכיבים עיקריים כגון מקור אור, מערכת לוחות סינון ומערכת אופטית. זה להשתמש באורך גל מסוים של אור כדי לעורר את הדגימה כדי לפלוט פלואורסצנטי, ולצפות בתמונת הקרינה של הדגימה על ידי הגברה של עדשת האובייקט והעינית.
מבנה ומרכיבים עיקריים של מיקרוסקופ פלואורסצנטי
(1) מקור אור
כיום, מנורות כספית בלחץ גבוה במיוחד של 200W משמשות לעתים קרובות כמקורות אור. הם עשויים מזכוכית קוורץ, עם צורה כדורית באמצע, ומלאה בתוכם כמות מסוימת של כספית. במהלך העבודה הפריקה בין שתי האלקטרודות גורמת לכספית להתאדות, ולחץ האוויר בכדור עולה במהירות. כאשר הכספית מתאדה לחלוטין, היא יכולה להגיע ללחץ אטמוספרי סטנדרטי של 50-70, ותהליך זה אורך בדרך כלל כ-5-15 דקות. הארה של מנורת הכספית בלחץ גבוה במיוחד היא תוצאה של פליטת קוונטות אור במהלך הניתוק המתמשך והפחתת מולקולות הכספית על ידי הפריקה בין האלקטרודות. הוא פולט אור אולטרה סגול וכחול סגול חזק, שמספיק לעורר חומרים פלורסנטים שונים, ולכן נעשה בו שימוש נרחב במיקרוסקופ פלואורסצנטי.
מנורות כספית בלחץ גבוה במיוחד פולטות חום רב. לכן, בית המנורה חייב להיות בעל תנאי פיזור חום טובים, וטמפרטורת סביבת העבודה לא צריכה להיות גבוהה מדי.
ניתן להדליק את מנורת הכספית החדשה בלחץ גבוה ללא מתח גבוה בתחילת השימוש. לאחר תקופת שימוש, יש להפעיל אותו במתח גבוה (בערך 15000V). לאחר ההפעלה, מתח העבודה התחזוקה הוא בדרך כלל 50-60V, וזרם העבודה הוא בערך 4A. אורך החיים הממוצע של מנורת כספית בלחץ אולטרה-גבוה 200W הוא כ-200 שעות אם משתמשים בה במשך שעתיים בכל פעם. ככל שזמן העבודה קצר יותר, אורך החיים קצר יותר. אם הוא משמש רק 20 דקות, תוחלת החיים תקטן ב-50 אחוז. לכן, צמצם את מספר ההתחלות בעת השימוש בו. במהלך השימוש בנורה, יעילות האור שלה פוחתת בהדרגה. לאחר כיבוי האור, המתן שיתקרר לפני הפעלה מחדש. אין לכבות את הנורה מיד לאחר הדלקתה, כדי לא לפגוע באלקטרודה עקב אידוי כספית לא שלם. בדרך כלל, זה צריך להמתין 15 דקות. בגלל הלחץ הגבוה של מנורת הכספית בלחץ האולטרה-גבוה והקרניים האולטרה-סגולות החזקות, יש להציב את הנורה בתא המנורה לפני הדלקתה, כדי לא לפגוע בעיניים ולגרום לפעולה במקרה של פיצוץ .
המעגל של מנורת הכספית בלחץ גבוה במיוחד (100W או 200W) מקור האור ומספר חלקים כולל שנאי, נטל והתנע. בתא המנורה קיימת מערכת להתאמת מרכז הנורה הזוהר. מאחורי נורת הנורה מותקן רפלקטור קעור בציפוי אלומיניום ובחזית מותקנת עדשה אוספת אור.
למנורת הכספית המקומית בלחץ גבוה במיוחד GCQ-200 יש ביצועים טובים ויכולה להחליף נורות מיובאות כגון HBO-200. אורך החיים הממוצע הוא יותר מ-200 שעות והמחיר נמוך יחסית.
מכשיר פשוט ונייד עם טמפרטורת צבע גבוהה ברום טונגסטן פלורסנט שפותח בארצי, בעל גודל קטן, קל משקל, הספק נמוך, AC ו-DC דו-שימושיים (עם ספק כוח DC), קל לנשיאה, קל לשימוש, זכה לפופולריות ויושם.
(2) מערכת סינון צבע
מערכת סינון הצבע היא חלק חשוב במיקרוסקופ הקרינה, המורכב מלוח מסנן עירור ומלוח מסנן לוחץ. דגם לוחית הסינון והשם של כל יצרן לרוב אינם אחידים. לוחות הסינון נקראים בדרך כלל על שם הצבע הבסיסי, האותיות מלפנים מייצגות את הצבע, האותיות מאחור מייצגות את הזכוכית, והמספרים מייצגים את מאפייני הדגם. מיקרוסקופ אולימפוס
(3) עדשה אובייקטיבית
ניתן להשתמש בעדשות אובייקטיביות שונות, אך נעשה שימוש בעדשות אובייקטיביות אכרומטיות מכיוון שהאוטופלואורסצנטי שלהן מינימלי ותכונות העברת האור שלהן (טווח אורכי גל) מתאימות לקרינה. מכיוון שבהירות הקרינה של התמונה בשדה הראייה של המיקרוסקופ היא פרופורציונלית לריבוע יחס הצמצם של עדשת האובייקטיב ובפרופורציה הפוך להגדלתה, על מנת לשפר את בהירות תמונת הקרינה, עדשת אובייקטיבית בעלת גודל גדול. יש להשתמש ביחס צמצם. במיוחד בהגדלה גבוהה ההשפעה שלו ברורה מאוד. לכן, עבור דגימות עם קרינה לא מספקת, יש להשתמש בעדשת אובייקטיבית עם יחס צמצם גדול עם עינית נמוכה ככל האפשר (4×, 5×, 6.3× וכו').
(4) מראה
השכבה הרפלקטיבית של הרפלקטור היא בדרך כלל מצופה באלומיניום, מכיוון שאלומיניום סופג פחות באזור הכחול-סגול של אור אולטרה סגול ואור נראה, וההשתקפות היא יותר מ-90 אחוז, בעוד שההשתקפות של כסף היא רק 70 אחוז. בדרך כלל, נעשה שימוש ברפלקטור שטוח.
(5) מעבה
מעבים המיועדים למיקרוסקופיה פלואורסצנטית עשויים מזכוכית קוורץ או זכוכית אחרת שקופה UV. ישנם שני סוגים של מעבים שדה ברורים ומעבים שדה כהים. ישנם גם ריכוזי פלואורסצנטי פאזה ניגודיות.
(6) מכשיר Epi-light
הסוג החדש של מכשירי אפי-לייט הוא שלאחר שהאור ממקור האור פוגע במסנן הספקטרוסקופי ההפרעות, מוחזר החלק באורך הגל הקצר (אולטרה סגול וכחול סגול) עקב תכונות הציפוי על המסנן. כאשר המסנן פונה אל מקור האור, הזווית היא 45. כאשר הוא מוטה, הוא מצלם לעדשת האובייקטיב בצורה אנכית, ומצלם אל הדגימה דרך עדשת האובייקטיב, כך שהדגימה מתרגשת. בשלב זה, עדשת האובייקטיבית פועלת ישירות כקולט אור. יחד עם זאת, החלק הארוך של הפילטר (ירוק, צהוב, אדום וכו') שקוף לפילטר, ולכן אינו משתקף לכיוון עדשת האובייקטיב, והפילטר פועל כפלטת מסנן עירור, מכיוון שהפלורסנטיות של הדגימה נמצאת באזור אורך הגל הארוך של האור הנראה, יכולה לעבור דרך המסנן ולהגיע לעינית לצורך התבוננות, בהירות תמונת הפלורסנט עולה עם עליית ההגדלה, והיא חזקה יותר מהאור המשודר. מקור בהגדלה גבוהה. בנוסף לתפקוד של מקור אור שידור, הוא מתאים יותר לצפייה ישירה בדגימות אטומות ושקופות, כגון פרוסות עבות, ממברנות סינון, מושבות ודגימות תרבית רקמה. מיקרוסקופי הקרינה החדשים שפותחו בשנים האחרונות משתמשים בעיקר במכשירי אפי-לייט, הנקראים מיקרוסקופים אפי פלואורסצנטיים.
