דרישות עובי מיקרוסקופ אופטי עבור שקופיות זכוכית
התייבשות מיקרוסקופית והצמדת דגימות: עקב צנטריפוגה חוזרת התאים הולכים לאיבוד, לכן עדיף להצמיד את התאים למשטח של שקף זכוכית או יריעת פלסטיק לצורך מיקרוסקופיה אופטית, כך שהתאים יתייבשו ויתייבשו יחד עם הזכוכית. שקופית או יריעת פלסטיק. דרישות לעובי של שקופיות זכוכית במיקרוסקופיה אופטית על מנת לאפשר לתאים להיצמד לשקופיות זכוכית או יריעות פלסטיק, יש צורך להניח תחילה שכבת סרט על שקופיות זכוכית או יריעות פלסטיק. שיטת הנחת הסרט היא כדלקמן:
(1) השיטה הפשוטה ביותר למיקרוסקופיה אופטית היא להניח שכבה דקה של סרט פוליוויניל פורמלי (formvar). השרו את השקופיות המנוקות בתמיסת כלורופורם פורמלית (0.5-1) אחוז פוליוויניל. לאחר שהאטמוספירה מתנדפת, מופיע סרט לבן על השקופיות. נער את השקופיות מספר פעמים בכלורופורם כדי לשנות את הסרט. דק ומוכן לשימוש.
(2) זרוק 0.1 קו רוחב פולי-L-ליזין (המס 1 מ"ג פולי-ליזין ב-1 מ"ל מים מסוננים במהלך ההכנה) על שקף הזכוכית המנוקה, והכנס אותו לקופסת אספקה של 450C לאחר שהטיפה נפתחת . יָבֵשׁ. שיטה זו היא הטובה ביותר מכיוון שפולי-L-ליזין טעון חיובי, מה שמאפשר לתאים נוספים בעלי מטען שלילי משטח להיצמד.
(3) הוסף פלזמה וגליצרול למים מזוקקים ביחס של (30--40) אחוז ו-(3-5) אחוז בהתאם לדרישות המיקרוסקופ האופטי לעובי השקופית ליצירת חלבון גליצרול פִּתָרוֹן. הנוזל נשמט על שקף הזכוכית המנוקה, נפרש ומייבש תחת המיקרוסקופ האופטי. סרט החלבון המונח טובל ב-2 אחוז גלוטראלדהיד כדי לקבע את החלבון, נשטף ומייבש לשימוש מאוחר יותר. לפני השימוש, הפלזמה מופלת על סרט החלבון הפוך אותו ל"מופעל", שטף עם חיץ לאחר 30 דקות, וניתן ליישם אותו ישירות.
מהתאים המקובעים והמנוקים מייצרים ריכוז מתאים של תרחיף תאים עם מים מסוננים במיקרוסקופ דיגיטלי, ואת המיקרוסקופ האופטי מניחים על שקופית זכוכית או יריעת פלסטיק שכוסתה בממברנה, ומניחים במשטח לח ונמוך. טמפרטורה (40C) סביבה (30-120) דקות כדי לאפשר לתאים להיצמד לממברנה. השתמש בפינצטה עדינה כדי להרים את שקופית הזכוכית ולנער אותה במים מזוקקים כפולים נקיים, ולשטוף תאים לא מחוברים עם מיקרוסקופ אופטי. דרישות לעובי השקופיות במיקרוסקופים אופטיים מיקרוסקופים מקטבים מונחים במהירות בכלי מלא ב-50 אחוז אצטון (או אתנול). תהליך ההתייבשות הוא לשים את השקופיות לתוך אצטון או אתנול עם ריכוז עולה כל 3 דקות, ואת המיקרוסקופ האופטי או להגדיל ברציפות את ריכוז החומר המייבש במיכל שקופיות הזכוכית. על פי ניסיון המעבדה של המחבר, הפעולה האחרונה נוחה יותר. השיטה הספציפית של מיקרוסקופיה אופטית יכולה למצוץ מחצית מהחומר המייבש במיכל כל 3 דקות, ולאחר מכן להוסיף כמות שווה של חומר מייבש בריכוז של 100 אחוז. לאחר פעולות 5-6, ריכוז החומר המייבש בכלי המחיר של המיקרוסקופ מגיע ליותר מ-0.5 אחוז, והתאים מתייבשים בהצלחה. לאחר ייבוש נקודה קריטית, שקף הזכוכית או יריעת הפלסטיק מודבקים למזח המדגם עם דבק מוליך לציפוי מתכת. יש גם נוחות להצמדת תאים לממברנות שנקבעו בשיטה השלישית. מיקרוסקופ אופטי יכול לתלות את התאים מקובעים על ידי ריכוז נמוך של גלוטראלדהיד על סרט החלבון ה"מופעל". המיקרוסקופ האופטי מחייב להניח את עובי שקף הזכוכית למשך 10 דקות, ואת שקף הזכוכית או יריעת הפלסטיק ספוג ב-2 אחוזים גלוטאראלדהיד. לאחר 30 דקות, יש לשטוף במים מזוקקים כפולים מסוננים, ולאחר מכן לייבש, לייבש ולכסות מתכת לפי השיטה לעיל.
