מדוע ההגדלה של עדשת השמן גדולה מזו של עדשת האובייקטיב הרגילה?
סיבות מדוע יש לתקן חיידקים לפני צביעה בניסויים מיקרוביולוגיים:
1: הורג תאים, קל להכתים עם צבע.
2: לגרום לחיידקים להיצמד לשקופית הזכוכית, וזה לא קל להישטף במים.
בעת התיקון, יש לייבש אותו לאט. אם אתה באמת רוצה להאיץ, אתה יכול לייבש אותו כמה פעמים במרחק מעל להבת מנורת האלכוהול. אל תתנו לזכוכית להחליק להתחמם, אחרת היא עלולה להרוס את צורת החיים של חיידקים.
צביעת גראם ותצפית מיקרוסקופית של חיידקים
1. עקרון ניסוי
עקרון צביעת גראם: חיידקים מגיבים אחרת לצביעת גראם בשל ההרכב והמבנה של דפנות התא שלהם. דופן התא של חיידקים גראם חיוביים היא בעיקר קשר רשת שנוצר על ידי פפטידוגליקן. כאשר מטפלים באתנול, גודל הנקבוביות של מבנה הרשת קטן יותר עקב התייבשות, והחדירות יורדת, כך שהקומפלקס של קריסטל סגול-יוד החומר לא קל להיפלט ולהישמר בתא, והכחול- הצבע הסגול של חומר הצביעה העיקרי עדיין נשמר לאחר דה-צבע וצביעה נגדית. שכבת הפפטידוגליקן של דופן התא של חיידקים גראם-שליליים דקה ותכולת השומנים גבוהה, ולכן כאשר מבצעים את הטיפול בדה-צבע, השומנים מומסים על ידי אתנול (או אצטון), וחדירותו של דופן התא עולה, כך שהקומפלקס של קריסטל סיגלית-יוד קל יותר להיחלץ, ולאחר צביעה נגדית עם כתם נגדי, התאים נצבעים בצבע האדום של הכתם נגדי. עקרון הדמיה במיקרוסקופ: מיקרוסקופים אופטיים מודרניים רגילים משתמשים בשתי מערכות עדשות של עינית ועדשה אובייקטיבית כדי להגדיל את התמונה, ולכן הם נקראים לעתים קרובות מיקרוסקופים מורכבים. במערכת האופטית של המיקרוסקופ, הביצועים של עדשת האובייקטיב הם הקריטיים ביותר, וההגדלה של עדשת השמן היא הגדולה ביותר, שהיא החשובה ביותר למחקר מיקרוביולוגי. המטרה העיקרית של הוספת שמן טבילה בין שקף הזכוכית לעדשה היא להגביר את בהירות ההארה ולהגדיל את הרזולוציה של המיקרוסקופ. שמן משמש במקום אוויר כאמצעי העברת האור כדי להפחית את השבירה או השתקפות מוחלטת של האור ולהפוך את התמונה הנצפית לבהירה יותר.
2. ציוד נסיוני
1. מושבות:
Escherichia coli 24 שעות תרבית אגר מזין,
Staphylococcus aureus כ-24 שעות תרבית אגר מזין, Bacillus subtilis 12-18h תרבות אגר מזין.
2. פתרונות או ריאגנטים:
מים מזוקקים, תמיסת יוד, תמיסת צביעה בסגול קריסטל, אלכוהול 95 אחוז, תמיסת צביעה ספרנין, שמן ארז. 3. מכשיר:
מיקרוסקופ, שקף זכוכית, לולאת חיסון, מנורת אלכוהול, פינצטה, רקמת עדשה.
3. שלבי ניסוי
a:
1. למרוח
הוציאו את השקף, הדליקו את השקף, שרפו את האלכוהול על השקף ועיקרו אותו, שימו טיפה קטנה של מים מזוקקים באמצע, השתמשו בלולאת החיסון כדי לבחור בעדינות כמות קטנה של חיידקים על המדיום האלכסוני של הבדיקה צינור, במהלך כל התהליך, פתח המבחנה צריך להיות מעל מנורת האלכוהול, והמהירות צריכה להיות מהירה כדי למנוע זיהום של מצע התרבות. לאחר מכן יש למרוח את טיפות המים הקטנות על שקף הזכוכית בתנועה מעגלית, לעצור כאשר טיפות המים עכורות ולהמתין שיתייבשו ויתקבעו.
2. צביעה ראשונית
זרוק סגול קריסטל (מתאים רק לכסות את סרט החיידק) על המושבה, צובעים למשך 1-2 דקות, שופכים את תמיסת הצביעה, ושוטפים במים עדינים מהחלק העליון של השקופית עד שהמפלט חסר צבע, ומניחים את הכתם על השקף. מנערים את המים על הפרוסות.
3. מורנט
הוסף תמיסת יוד טיפה כדי לשטוף את שאריות המים, כסה למשך כדקה ושטוף במים.
4. דה-צבע
לנער את המים על שקף הזכוכית, להטות את שקף הזכוכית, ולהוסיף 95 אחוז אלכוהול כדי לדעוך אותו מתחת לרקע הלבן, עד שהאלכוהול היוצא פשוט לא נראה כחול, מיד לשטוף את האלכוהול במים, ולהניח את שקף הזכוכית לנער להוריד את המים על הפרוסות.
5. צביעה נגדית
צביעה נגדית בתמיסת ספרנין למשך כ-1-2 דקות, שטפה במים ולאחר מכן תייבש את הספיגה בנייר סופג
6. בדיקה מיקרוסקופית:
חפשו את מושבת החיידקים שיש לראות מתחת לעדשת ההגדלה הנמוכה (המשיכו להזיז את השקף, אם אתם מרגישים צל אדום, עצרו מיד, התאם את ההגדלה, אם לא מדובר במושבה, המשיכו למצוא), הרם את קנה העדשה, ולאחר מכן עבור למראה השמן. הוסיפו טיפה של שמן ארז לאזור הדגימה, והורידו בזהירות את חבית העדשה בעזרת מכוון הגס, כך שעדשת השמן טבולה בשמן וכמעט נוגעת בדגימה. הרם את הקבל למצב הגבוה ביותר ופתח את הצמצם במלואו, השתמש במכוונן הגס כדי להעלות את קנה העדשה באיטיות עד שתמונת האובייקט מופיעה בשדה הראייה והשתמש במכוונן העדין כדי שיהיה ברור וממוקד.
