מה ההבדל בין פלואורסצנטי למיקרוסקופיה קונפוקלית בלייזר?
מיקרוסקופ פלואורסצנטי
1. מיקרוסקופ פלואורסצנטי הוא מכשיר המשתמש באור אולטרה סגול כמקור אור כדי להאיר את האובייקט הנבדק, מה שגורם לו לפלוט פלואורסצנטי ולאחר מכן לצפות בצורתו ובמיקומו של האובייקט מתחת למיקרוסקופ. מיקרוסקופ פלואורסצנטי משמש לחקר הספיגה, ההובלה, ההפצה והלוקליזציה של חומרים בתוך תאים. חומרים מסוימים בתאים, כמו כלורופיל, יכולים לפלוט פלואורסצנטיות לאחר שנחשפו לקרינה אולטרה סגולה; חלק מהחומרים עצמם עשויים שלא לפלוט פלואורסצנטי, אבל אם הם מוכתמים בצבעים ניאון או נוגדנים פלואורסצנטיים, הם יכולים גם לפלוט פלואורסצנטיות תחת קרינה אולטרה סגולה. מיקרוסקופ פלואורסצנטי הוא אחד הכלים למחקר איכותני וכמותי על חומרים אלו.
2. עקרון מיקרוסקופ פלואורסצנטי:
(א) מקור אור: מקור האור פולט אור באורכי גל שונים (מאולטרה סגול ועד אינפרא אדום).
(ב) מקור אור מסנן עירור: העברת אור באורך גל מסוים שיכול לייצר פלואורסצנטיות בדגימה, תוך חסימת אור שאין בו תועלת לקרינה עירור.
(ג) דגימות פלואורסצנטיות: מוכתמות בדרך כלל בפיגמנטים ניאון.
(ד) מסנן חסימה: מעביר קרינה סלקטיבית על ידי חסימת אור עירור שלא נספג על ידי הדגימה, וכמה אורכי גל מועברים גם באופן סלקטיבי בפלורסנטיות. מיקרוסקופ המשתמש באור אולטרה סגול כמקור אור לפליטת פלואורסצנטי מהאובייקט המוקרן. מיקרוסקופ האלקטרונים הורכב לראשונה על ידי קנור והרוסקה בברלין, גרמניה בשנת 1931. סוג זה של מיקרוסקופ משתמש בקרן אלקטרונים במהירות גבוהה במקום בקרן אור. בשל אורך הגל הקצר בהרבה של זרימת האלקטרונים בהשוואה לגלי אור, ההגדלה של מיקרוסקופ האלקטרונים יכולה להגיע פי 800000, עם מגבלת רזולוציה מינימלית של 0.2 ננומטר. מיקרוסקופ האלקטרונים הסורק, שהחל בשימוש ב-1963, מאפשר לאנשים לראות את המבנים הזעירים על פני השטח של עצמים.
3. היקף יישום: משמש להגדלת תמונות של אובייקטים קטנים. משמש בדרך כלל לתצפית על ביולוגיה, רפואה, חלקיקים מיקרוסקופיים וכו'.
מיקרוסקופ קונפוקאלי
1. מיקרוסקופ קונפוקאלי מוסיף עדשה חצי רפלקטיבית לנתיב האור המוחזר, אשר מכופפת את האור המוחזר שכבר עבר בעדשה לכיוונים אחרים. יש בפל עם חריר בנקודת המוקד שלו, והחור הקטן ממוקם בנקודת המוקד. מאחורי הבלאט נמצא צינור פוטו-מכפיל. ניתן לדמיין שהאור המוחזר לפני ואחרי מוקד אור הזיהוי לא יכול להיות ממוקד על החור הקטן דרך מערכת קונפוקאלית זו והוא ייחסם על ידי הבלאט. אז הפוטומטר מודד את עוצמת האור המוחזר בנקודת המוקד.
2. עקרון: מיקרוסקופים אופטיים מסורתיים משתמשים במקורות אור שדה, והתמונה של כל נקודה בדגימה תושפע מעקיפה או מאור מפוזר מנקודות שכנות; מיקרוסקופ קונפוקאלי סריקת לייזר משתמש בקרן לייזר כדי ליצור מקור אור נקודתי דרך חריר מואר כדי לסרוק כל נקודה במישור המוקד של הדגימה. הנקודה המוארת על הדגימה מצטלמת בחריר הזיהוי, ומתקבלת נקודה אחר נקודה או קו על ידי צינור מכפיל פוטו (PMT) או התקן צימוד תרמו-אלקטרי (cCCD) לאחר חריר הזיהוי, ויוצר במהירות תמונה ניאון על צג המחשב מָסָך. חריר התאורה וחור הזיהוי מצומדים ביחס למישור המוקד של עדשת המטרה. הנקודות במישור המוקד ממוקדות בו זמנית בחריר ההארה ובחור הפליטה, ונקודות מחוץ למישור המוקד לא יצולמו בחריר הזיהוי. זה מביא לתמונה קונפוקלית המייצגת את החתך האופטי של הדגימה, ומתגברת על החיסרון של תמונות מטושטשות במיקרוסקופיה קונבנציונלית.
3. תחומי יישום: הכוללים רפואה, חקר בעלי חיים וצמחים, ביוכימיה, בקטריולוגיה, ביולוגיה של התא, רקמות ועוברים, מדעי המזון, גנטיקה, פרמקולוגיה, פיזיולוגיה, אופטיקה, פתולוגיה, בוטניקה, מדעי המוח, ביולוגיה ימית, מדעי החומרים, מדע אלקטרוני, מכניקה, גיאולוגיה של נפט ומינרלוגיה.
