מהם היתרונות של מיקרוסקופיה לייזר קונפוקלית
בהשוואה למיקרוסקופים מסורתיים רחבי שדה, למיקרוסקופיה קונפוקלית סריקת לייזר יש את המאפיינים של הגדרה גבוהה, רזולוציה גבוהה ורגישות גבוהה. הוא נמצא בשימוש נרחב בתחום הביו-רפואה והפך לכלי הדמיה חשוב בתחום זה. למה confocal יכול לקבל כל כך הרבה אהבה, ואילו יתרונות יש לזה? מאמר זה מפרט שלושה היבטים לדיון ביתרונות של confocal.
אסוף את האות רק במישור המוקד, מה שהופך את התמונה ברורה מטשטוש
אז איך משיגה מיקרוסקופיה קונפוקלית את היתרון הזה? זה נובע מהחומרה הקונפוקלית המרכזית - חריר, כפי שמוצג באיור 2. זהו חור קטן מול הגלאי וממוקם על המישור האופטי המצומד למישור המוקד של הדגימה. כאשר אור העירור מקרין את המדגם, הן המישור המוקד והן המישור הלא-מוקדי של אזור הדגימה יתרגשו ליצירת אותות הקרינה, התאם את גודל החור המתאים (בדרך כלל 1 Au), כך שאות הקרינה במישור המוקד. (קו מקווקו ירוק) יכולים להיות אותות פלורסנט (קווים מקווקוים אדומים וכחולים) שעוברים דרך החיר כדי להגיע לגלאי מחוץ למישור המוקד אינם יכולים להגיע לגלאי דרך החיר. באמצעות הוספת חרירי חומרה, הקונפוקאל יכול לקבל תמונות ברורות ואיכותיות מבלי לשנות את שיטת הכנת מיקרוסקופים פלואורסצנטיים רגילים.
בשל קיומו של חריר, נוכל לרכוש רק את האות במישור המוקד ולקבל תמונה דו-ממדית ברזולוציה גבוהה. על ידי כוונון רציף של מיקום ציר Z, ניתן לקבל תמונות דו מימדיות במיקומים שונים של ציר Z, ולקבל סדרה של תמונות "פרוסה אופטית" רציפה. לאחר השגת פרוסות אופטיות אלה, ניתן להשתמש במודול התלת-ממד המצויד בתוכנת המכשיר כדי לשחזר את התמונה התלת-ממדית כדי לבנות תמונה תלת-ממדית ברורה. אוסף בלתי הרסני ורציף זה של תמונות פרוסה אופטיות מממש את הפונקציה של "תא CT".
הדיוק של תוצאות ה-colocalization קשור קשר הדוק לרזולוציית התמונה, ולכן עלינו לבחור בשיטת הדמיה ברזולוציה גבוהה יותר בעת ביצוע ניסויי colocalization. בהשוואה למיקרוסקופים מסורתיים, מיקרוסקופיה קונפוקלית הפכה לכלי רב עוצמה למחקר קולקליזציה בשל יתרונותיה ברזולוציה גבוהה.
בשל קיומו של מגבלת העקיפה, הרזולוציה האופטית הקונפוקלית הקונבנציונלית היא סביב 200 ננומטר. כאשר אנו צריכים לצפות במבנים גדולים מ-200 ננומטר, confocal יכול לקבוע במדויק את מידת ה-colocalization. אם נדרש ניתוח נקודת מוצא, ניתן לבחור את מודול ניתוח הקולקליזציה המצויד בתוכנת הקונפוקל.
