ההבדל בין מיקרוסקופ קונפוקאלי לייזר למיקרוסקופ אופטי מסורתי
סריקת לייזר מיקרוסקופיה פלואורסצנטית קונפוקלית היא מכשיר מתקדם יחסית לניתוח ביולוגיה מולקולרית ותאית המשתמש בטכנולוגיית מחשב, לייזר ועיבוד תמונה כדי לקבל נתונים תלת מימדיים של דגימות ביולוגיות. הוא משמש בעיקר לצפייה במבנה של תאים חיים ובשינויים הביולוגיים של מולקולות ויונים ספציפיים, ניתוח כמותי וקביעה כמותית בזמן אמת.
העיקרון של מיקרוסקופיה קונפוקלית בלייזר: השתמש בחריר ההארה הממוקם מאחורי מקור האור ובחור הזיהוי המוצב מול הגלאי כדי לממש הארת נקודה וזיהוי נקודות. האור הנפלט ממקור האור דרך חריר ההארה ממוקד בנקודה במישור המוקד של הדגימה, והקרינה הנפלטת מנקודה זו מצולם בחריר הזיהוי, וכל אור הנפלט מחוץ לנקודה זו נחסם על ידי הזיהוי חריר. חריר ההארה וחור הזיהוי מצומדים לנקודה המוקרנת או לנקודה שזוהתה, כך שהנקודה שזוהתה היא הנקודה הקונפוקלית, והמישור שבו ממוקמת הנקודה המזוהה הוא המישור הקונפוקאלי.
המחשב מציג את הנקודות שזוהו על מסך המחשב בצורה של נקודות תמונה. על מנת ליצור תמונה שלמה, מערכת הסריקה בנתיב האופטי סורקת במישור המוקד של הדגימה כדי ליצור תמונה קונפוקלית מלאה. כל עוד הבמה נעה למעלה ולמטה לאורך ציר Z, שכבה חדשה של הדגימה מועברת למישור הקונפוקאלי, והשכבה החדשה של הדגימה מצטלמת על הצג. עם התנועה המתמשכת של ציר Z, ניתן לקבל תמונות רציפות של שכבות שונות של המדגם. תמונה חתוכה בהירה.
ההבדל בין מיקרוסקופי אור מסורתיים
למיקרוסקופים פלואורסצנטיים מסורתיים יש חסרון שאי אפשר להתגבר עליו: המבנים הפלורסנטים מחוץ למישור המוקד מטושטשים ומטושטשים. הסיבה היא שלרוב הדגימות הביולוגיות יש מבנים חופפים. אם המבנים המסומנים בפלורסצנטי מפוזרים ברמות שונות וחופפים, הקרינה המפוזרת מלמעלה או מתחת למישור המוקד מתקבלת גם על ידי עדשת האובייקטיב, והרזולוציה של מיקרוסקופ הקרינה תשתפר מאוד. לְהַפחִית.
על בסיס מיקרוסקופים אופטיים מסורתיים, מיקרוסקופים קונפוקאליים סריקת לייזר משתמשים באור לייזר כמקור האור, מאמצים את העיקרון והמכשיר של מיקוד מצומד, ומשתמשים במחשבים כדי לבצע עיבוד תמונה דיגיטלית, תצפית, ניתוח ופלט של האובייקטים הנצפים. ניתן לסרוק את המדגם בצורה טומוגרפית ולהצטלם לצורך תצפית וניתוח לא הרסניים של המבנה המרחבי התלת מימדי של תאים. במקביל, באמצעות תיוג אימונופלואורסצנטי ובדיקות תיוג ניאון יונים, טכנולוגיה זו יכולה לא רק לצפות בתאים קבועים ובחתכי רקמה, אלא גם לבצע תצפית דינמית וזיהוי בזמן אמת של המבנה, המולקולות, היונים ופעילויות החיים של תאים חיים, ברמה התת-תאית התבוננות באותות פיזיולוגיים כגון Ca2 plus, ערך pH, פוטנציאל הממברנה ושינויים במורפולוגיה של התא, הפכה לדור חדש של כלי מחקר רבי עוצמה בתחומי המורפולוגיה, ביולוגיה מולקולרית של תאים, מדעי המוח, פרמקולוגיה וגנטיקה.
