טכניקות צביעה ותצפית מיקרוסקופית במיקרואורגניזמים

טכניקות צביעה ותצפית מיקרוסקופית במיקרואורגניזמים

צביעה פשוטה של ​​חיידקים
1 יעדים

1.1 ללמוד את הטכניקות הבסיסיות של מריחת חיידקים וצביעה.

1.2 לשלוט בשיטת הצביעה הפשוטה של ​​חיידקים.

1.3 להכיר את המאפיינים המורפולוגיים של חיידקים, ולגבש את לימוד השימוש במראה שמן ובטכניקות פעולה אספטיות.

2 עקרון המריחה והצביעה של חיידקים היא טכניקה בסיסית בניסויים במיקרוביולוגיה. תאי החיידקים קטנים ושקופים, לא קל לזהות אותם במיקרוסקופ האור הרגיל, והם חייבים להיות מוכתמים. השימוש בצבע יחיד כדי לצבוע את החיידקים, כך שהאורגניזם המוכתם והרקע ייצור הבדל צבע ברור, כך שניתן יהיה לראות בצורה ברורה יותר את המורפולוגיה והמבנה שלהם. שיטה זו קלה לביצוע ומתאימה להתבוננות בצורתו הכללית של האורגניזם ובסידור החיידקים. צבעים אלקליים משמשים בדרך כלל לצביעה פשוטה, מכיוון שבתמיסות ניטרליות, אלקליות או חומציות חלשות, תאי חיידקים בדרך כלל טעונים שלילי, וכאשר צבעים אלקליים מיוננים, החלק המכתים של המולקולות שלהם טעון חיובי, כך שהחלק המכתים של צבעים אלקליין יכול בקלות להיקשר לחיידקים כדי להפוך את החיידק לצבעוני. תאי החיידק המוכתמים מנוגדים בצורה חדה לרקע וקל יותר לזהות אותם מתחת למיקרוסקופ. הצבעים הנפוצים לצביעה פשוטה כוללים כחול מרוציאנין, סגול קריסטל ואדום תרכובת בסיסית. כאשר הפירוק החיידקי של סוכר לייצר חומצה כך שה-pH של המדיום יורד, המטען החיובי של החיידקים גדל, ולאחר מכן ניתן להשתמש בו בצביעת אדום, אדום חומצי או קונגו וצבעים חומציים אחרים. יש לתקן את החיידקים לפני הצביעה. מטרתו כפולה: האחת היא להרוג את החיידקים ולגרום לחיידקים להיצמד למגלשה; השני הוא להגביר את הזיקה שלו לצבע. שתי שיטות נפוצות: חימום וקיבוע כימי. נסה לשמור על המורפולוגיה המקורית של התאים בעת התיקון.

3 חומרים
3.1 זן Bacillus subtilis 12-18h תרבות אגר תזונתית, Staphylococcus aureus כ-24 שעות תרבות אגר תזונתיים, Escherichia coli 24 שעות תרבית אגר תזונתיים, תרבית אגר מזין של שמרי אפייה.

3.2 כתם כתם כחול מתילן אלקליין של Lue (או כתם סגול קריסטל אמוניום אוקסלט), כתם אדום של תרכובת חומצה קרבולית.

3.3 מכשירים או אביזרים אחרים מיקרוסקופ, מנורת אלכוהול, שקף, טבעת חיסון, מחזיק שקופיות, בקבוק דו-שכבתי (מלא בשמן ארז וקסילן), נייר מיקרוסקופ, מלוחים פיזיולוגיים או מים מזוקקים וכו'.

4 נוהל מריחה → ייבוש → קיבוע → צביעה → כביסה → ייבוש → בדיקה מיקרוסקופית.

5 שלבים
5.1 מריחה קח שתי שקופיות נקיות וללא שמן, כל אחת עם טיפה קטנה של תמיסת מלח (או מים מזוקקים) במרכז השקופית בתנאים אספטיים, עם טבעת חיסון להפעלה אספפטית, בהתאמה, מה-Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus ו- Escherichia coli לקטוף מעט אזוב בטיפת המים, ערבוב ומצופה בסרט. אם תרחיף חיידקים (או תרבית נוזלית) למרוח, ניתן להשתמש כדי לחסן את הטבעת לבחור 2 עד 3 טבעות ישירות על השקף. שימו לב שהמלח (מים מזוקקים) ולקחת את החיידקים לא צריכים להיות יותר מדי ולפזר באופן שווה, לא סמיך מדי.

5.2 ייבוש יבש באופן טבעי בטמפרטורת החדר. ניתן לייבש אותו גם על ידי חימום מעט מעל מנורת אלכוהול כשהצד המצופה כלפי מעלה. עם זאת, אל תתקרב יותר מדי ללהבה, כי הטמפרטורה גבוהה מדי תהרוס את המורפולוגיה של החיידקים.

5.3 קיבוע אם נעשה שימוש בייבוש בחום, קיבוע וייבוש משולבים לשלב אחד באותו אופן כמו ייבוש. למרוח, לייבש ולתקן חום.

5.4 צביעה הנח את השקף שטוח על מדף השקופיות, הוסף 1 עד 2 טיפות של תמיסת צביעה על המריחה (תמיסת הצביעה רק מכסה את סרט המריחה מתאים). צובעים את המריחה ב-Lü's Basic Mellanox Blue למשך 1~2 דקות, וב-Carbonate Red (או Ammonium Oxalate Crystal Violet) למשך כ-1 דקה.

5.5 שטיפה שפכו את תמיסת הצביעה ושטפו בעדינות במי ברז מקצה אחד של השקף עד שהמים שירדו מהמריחה יהיו חסרי צבע. בעת השטיפה, אל תתנו למים לזרום ישירות כדי לשטוף את המשטח המצופה. זרימת המים לא צריכה להיות מהירה מדי או גדולה מדי כדי למנוע עקירת סרט המריחה.

5.6 ייבוש יש לנער את טיפות המים על השקף לייבוש טבעי, ניתן להשתמש בנייר ייבוש או סופג לספיגת היבש (היזהר לא לנגב את גוף החיידק). 5.7 בדיקה מיקרוסקופית המריחה מיובשת ונבדקת במיקרוסקופיה. המריחה חייבת להיות יבשה לחלוטין לפני שניתן לצפות בה במיקרוסקופ שמן.

6 תוצאות צייר את המורפולוגיה של E. coli ו-Micrococcus garciniae לאחר צביעה בודדת.

צביעת גראם

1. מטרה
1.1 להבין את העיקרון של כתם גראם וחשיבותו בסיווג וזיהוי חיידקים.

1.2 ללמוד ולשלוט בטכניקת צביעה גראם ולגבש את הלמידה של השימוש בעדשת השמן של מיקרוסקופ האור.