הכנה והתבוננות בדגימות ביולוגיות למיקרוסקופ אלקטרוני
הרזולוציה של המיקרוסקופ תלויה באורך הגל של האור בו נעשה שימוש, מיקרוסקופ האלקטרונים החל להופיע בשנת 1933 נובע משימוש באורך גל קצר בהרבה מהאור הנראה של קרן האלקטרונים כמקור אור, כך שהרזולוציה שלו. יכול להשיג יותר מאשר המיקרוסקופ האופטי השתפר מאוד. מקור האור השונה קובע גם סדרה של הבדלים בין מיקרוסקופ האלקטרונים למיקרוסקופ האופטי.
על פי ההבדלים בעקרון ההדמיה של קרן האלקטרונים ותפקידה של הדגימה בדרכים השונות, מיקרוסקופ האלקטרונים המודרני פותח ליצירת מספר סוגים, כיום *השימוש הנפוץ הוא מיקרוסקופ אלקטרוני ההולכה ואלקטרון סורק מיקרוסקופ, הראשון יכול להיות בטווח של פי 1,000-1,000,000 מההגדלה הכוללת של טווח השינויים, השני יכול להיות בהיקף הכולל של { {4}},000 פעמים ההגדלה הכוללת של השינויים בין. ניסוי זה מתמקד בהכנת דגימות עבור שני סוגי המיקרוסקופים, מיקרוסקופ אלקטרוני תמסורת ומיקרוסקופ אלקטרוני סורק.
חומרים
1. זן Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) בנטייה.
2. תמיסות או ריאגנטים אמיל אצטט, חומצה גופרתית מרוכזת, אתנול נטול מים, מים סטריליים, חומצה 2% נתרן פוספוטונגסטית (pH 6.5-8.0) תמיסה מימית, 0.3% תמיסת פוליוויניל פורמלדהיד (מומס בטריכלורומתאן), ציטוכרום c, אמוניום אצטט, פלסמיד pBR322.
3. מכשירים או אביזרים אחרים מיקרוסקופ אופטי רגיל, רשת נחושת, משפך חרסינה, כוס, צלחת שטוחה, בורה סטרילית, פינצטה סטרילית, לאנסט, שקופיות, ** לוחית ספירה, ציפוי ואקום, מייבש נקודה קריטית וכן הלאה.
שלבי תפעול
(I) הכנת דגימה ותצפית של מיקרוסקופ אלקטרונים העברה
1. טיפול ברשת מתכת
דגימות למיקרוסקופיה אופטית מונחות על שקופיות לתצפית. עם זאת, במיקרוסקופ אלקטרוני תמסורת, מכיוון שהאלקטרונים אינם יכולים לחדור ליריעת הזכוכית, ניתן להשתמש רק בחומר רשת כנשא, הנקרא בדרך כלל רשת נשא. ניתן לחלק את רשת הנשא למפרטים רבים ושונים בשל חומרים וצורות שונות, כאשר * הנפוץ שבהם הוא רשת הנחושת 200-400 (מספר חורים). יש לטפל ברשת נחושת לפני השימוש כדי להסיר את הלכלוך שעליה ולשמור עליה נקייה, אחרת זה ישפיע על איכות הסרט התומך ועל בהירות תמונות הדגימה. רשת הנחושת המשמשת בניסוי זה היא 400 mesh, שניתן לטפל בה באופן הבא: ראשית, הלבין אותה באמיל אצטט למשך מספר שעות, לאחר מכן שטפו אותה במים מזוקקים מספר פעמים, ולאחר מכן הלבינו אותה באתנול נטול מים. התייבשות. אם רשת הנחושת בשיטה הנ"ל עדיין לא נקייה, ניתן להשתמש בה כדי לדלל חומצה גופרתית מרוכזת (1:1) טבולה תוך 1 ~ 2 דקות, או בתמיסת 1% NaOH מבושל במשך מספר דקות, שטוף מספר פעמים במים מזוקקים , מונח בהתייבשות אתנול נטול מים, לשימוש.
2. הכנת סרט תמיכה
בתצפית המדגם, ברשת הנשא יש לכסות גם בשכבה של סרט לא מובנה ואחיד, אחרת דגימות קטנות ידלפו מהחורים ברשת הנשא, שכבת הסרט הזו נקראת בדרך כלל סרט התמיכה או ה-carrier film. סרט התמיכה צריך להיות שקוף לאלקטרונים, ועוביו צריך להיות בדרך כלל פחות מ-20 ננומטר; תחת השפעת קרן האלקטרונים, הסרט צריך להיות גם בעל מידה מסוימת של חוזק מכני, יכול לשמור על יציבות המבנה ויש לו מוליכות תרמית טובה; בנוסף, לרשת התמיכה לא צריך להיות מבנה גלוי מתחת למיקרוסקופ האלקטרונים, ואין לה תגובה כימית עם הדגימה הנישאת, ואינה מפריעה לתצפית על המדגם, ועוביה הוא בדרך כלל כ-15 ננומטר. סרט התמיכה יכול להיות עשוי מסרט פלסטיק (למשל סרט כותנה אש, סרט פוליאתילן פורמלדהיד וכו'), סרט פחמן או סרט מתכת (למשל סרט בריליום וכו'). בתנאי עבודה שגרתיים, ניתן לעמוד בדרישות עם סרט פלסטיק, בעוד שהכנת סרט הפלסטיק בסרט הדבקה של כותנה אש היא קלה יחסית, אך החוזק אינו חזק כמו סרט פוליאתילן פורמלדהיד.
