הכנה ותצפית על דגימות ביולוגיות למיקרוסקופ אלקטרוני
הרזולוציה של מיקרוסקופ תלויה באורך הגל של האור המשמש. מיקרוסקופ האלקטרונים, שהחל להופיע ב-1933, משתמש בקרן אלקטרונים בעלת אורך גל קצר בהרבה מזה של האור הנראה כמקור אור, כך שהרזולוציה שהוא יכול להשיג משופרת מאוד בהשוואה לזו של מיקרוסקופ אופטי. ההבדל במקורות האור קובע גם סדרה של הבדלים בין מיקרוסקופים אלקטרונים למיקרוסקופים אופטיים.
על פי ההבדלים בעקרונות הדמיית קרן אלקטרונים ודרכי הפעולה השונות על דגימות, מיקרוסקופים אלקטרוניים מודרניים התפתחו לסוגים רבים. נכון לעכשיו, הנפוצים שבהם הם מיקרוסקופי אלקטרונים תמסורת ומיקרוסקופים אלקטרונים סורקים. ההגדלה הכוללת של הקודמת יכולה להיות בין 1000-1000000. ההגדלה הכוללת של האחרון יכולה להשתנות בין פי 20 ל-300,000 פעמים. ניסוי זה מציג בעיקר הכנת שני סוגים של דגימות מיקרוסקופ, מיקרוסקופ אלקטרוני תמסורת ומיקרוסקופ אלקטרוני סורק.
2. ציוד
1. חיידקי Escherichia coli (Escherichia coli) נטויים.
2. תמיסה או מגיב אמיל אצטט, חומצה גופרתית מרוכזת, אתנול מוחלט, מים סטריליים, 2% נתרן פוספוטונגסטאט (pH 6.5-8.0) תמיסה מימית, 0.3% פוליאתילן תמיסת פורמלדהיד (מסיסה בכלורופורם), תאים פיגמנט c, אמוניום אצטט, פלסמיד pBR322.
3. מכשירים או כלים אחרים: מיקרוסקופ אופטי רגיל, רשת נחושת, משפך חרסינה, כוס, צלחת, טפטפת סטרילית, פינצטה סטרילית, סיכות, שקופיות, לוח ספירה, מכונת ציפוי בוואקום, מייבש נקודה קריטית וכו'.
3. שלבי תפעול
(1) הכנת דגימה ותצפית למיקרוסקופ אלקטרונים העברה
1. טיפול ברשת מתכת
הדגימה למיקרוסקופיה אופטית מונחת על שקופית זכוכית לצורך התבוננות. עם זאת, במיקרוסקופיה אלקטרונית העברה, מכיוון שהאלקטרונים אינם יכולים לחדור ליריעת הזכוכית, ניתן להשתמש בחומרי רשת רק כנשאים, הנקראים בדרך כלל רשתות נושאות. ניתן לחלק את רשת הנשא למפרטים רבים ושונים בשל חומרים וצורות שונות, ביניהם הנפוצה ביותר היא רשת נחושת 200-400 (מספר חורים). יש לטפל ברשת הנחושת לפני השימוש כדי להסיר לכלוך ולשמור עליה נקייה, אחרת זה ישפיע על איכות סרט התמיכה ועל בהירות תמונות הדגימה. ניסוי זה משתמש ברשת נחושת 400-, שניתן לטפל בה באופן הבא: תחילה, השרו והלבינו אותה באמיל אצטט למשך מספר שעות, לאחר מכן שטפו אותה במים מזוקקים מספר פעמים, ולאחר מכן השרו אותה באתנול מוחלט למשך התייבשות. אם רשת הנחושת עדיין לא נקייה לאחר השיטות הנ"ל, ניתן להשרות אותה בחומצה גופרתית מרוכזת מדוללת (1:1) למשך 1 עד 2 דקות, או להרתיח אותה בתמיסת NaOH 1% למשך מספר דקות, לשטוף אותה עם מזוקקת מים מספר פעמים, ולאחר מכן שים אותו במייבש מים מים באתנול והניח בצד.
2. הכנת קרום תמיכה
בעת התבוננות בדגימות יש לכסות גם את רשת המוביל בשכבה של סרט לא מובנה ואחיד, אחרת דגימות קטנות ידלפו החוצה מהחורים של רשת המוביל. סרט זה נקרא בדרך כלל סרט תמיכה או סרט נשא. סרט התמיכה צריך להיות שקוף אלקטרוני, ועוביו צריך להיות בדרך כלל פחות מ-20 ננומטר; בהשפעת קרן האלקטרונים, הסרט צריך להיות בעל חוזק מכני מסוים כדי לשמור על יציבות מבנית ובעל מוליכות תרמית טובה; בנוסף, יש להשתמש ברשת התמיכה במיקרוסקופ אלקטרוני. לא צריך להיות מבנה גלוי מתחת, אין תגובה כימית עם הדגימה הנישאת, ואין הפרעה לתצפית על הדגימה. העובי שלו הוא בדרך כלל כ-15 ננומטר. הסרט התומך יכול להיות סרט פלסטיק (כגון סרט קולודיון, סרט פוליאתילן פורמלדהיד וכו'), סרט פחמן או סרט מתכת (כגון סרט בריליום וכו'). בתנאי עבודה רגילים, סרט פלסטיק יכול לעמוד בדרישות. בין סרטי הפלסטיק, סרט קולודיון קל יחסית להכנה, אך חוזקו אינו טוב כמו סרט פוליאתילן פורמלדהיד.
