הכנה ותצפית של דגימות ביולוגיות עבור מיקרוסקופים אלקטרונים
הרזולוציה של מיקרוסקופ תלויה באורך הגל של האור המשמש. מיקרוסקופ האלקטרונים, שהופיע ב-1933, השיג רזולוציה גבוהה משמעותית ממיקרוסקופ אופטי בשל השימוש בקרני אלקטרונים בעלות אורכי גל קצרים בהרבה מהאור הנראה כמקורות אור. מקורות האור השונים קובעים גם סדרה של הבדלים בין מיקרוסקופים אלקטרונים למיקרוסקופים אופטיים.
בהתבסס על ההבדלים בעקרונות של הדמיית קרן אלקטרונים והדרכים שבהן הם פועלים על דגימות, מיקרוסקופים אלקטרוניים מודרניים התפתחו לסוגים רבים. כיום, הנפוצים ביותר הם מיקרוסקופי אלקטרונים תמסורת ומיקרוסקופים אלקטרונים סורקים. לראשון יש הגדלה כוללת שיכולה להשתנות בין פי 1000-10000000, בעוד שלאחרון יש הגדלה כוללת שיכולה להשתנות בין פי 20-300000. ניסוי זה מציג בעיקר הכנה של שני סוגים של דגימות מיקרוסקופ, מיקרוסקופיה אלקטרונית העברה ומיקרוסקופ אלקטרונים סורק.
2, ציוד
1. זן Escherichia coli נוטה.
2. תמיסה או מגיב: פנטיל אצטט, חומצה גופרתית מרוכזת, אתנול נטול מים, מים סטריליים, תמיסה מימית של 2% נתרן פוספוטונגסטאט (pH 6.5-8.0), תמיסה מימית של 0.3% פוליוויניל פורמלדהיד (מומס בכלורופורם), ציטוכרום c, אמוניום אצטט 22, אמוניום אצטט.
3. מכשירים או כלים אחרים כוללים מיקרוסקופים אופטיים רגילים, רשתות נחושת, משפכי חרסינה, כוסות, צלחות פטרי, טפטפות סטריליות, פינצטות סטריליות, סיכות, שקופיות זכוכית, לוחות ספירה, מכונות ציפוי ואקום, מייבשי נקודה קריטית וכו'.
3, שלבי פעולה
(1) הכנה ותצפית של דגימות עבור מיקרוסקופיה אלקטרונית שידור
1. טיפול ברשת מתכת
הדגימה של מיקרוסקופ אופטי מונחת על שקופית זכוכית לצורך התבוננות. עם זאת, במראה שידור, מכיוון שהאלקטרונים אינם יכולים לחדור ליריעת הזכוכית, חומר רשת יכול לשמש רק כנשא, המכונה בדרך כלל רשת נשא. ניתן לחלק את רשת הנשא למפרטים שונים בשל חומרים וצורות שונות, ביניהם נפוץ רשת נחושת עם 200-400 רשת (מספר חורים). יש לטפל ברשת נחושת לפני השימוש כדי להסיר לכלוך ולשמור על נקיון, אחרת זה ישפיע על איכות הסרט התומך ועל בהירות תמונות הדגימה. רשת הנחושת 400 mesh המשמשת בניסוי זה ניתנת לטיפול בשיטה הבאה: תחילה יש להשרות ולצוף עם פנטיל אצטט למשך מספר שעות, לאחר מכן לשטוף מספר פעמים במים מזוקקים, ולבסוף לטבול ולהציף את רשת הנחושת באתנול נטול מים לצורך התייבשות. אם רשת הנחושת עדיין אינה נקייה לאחר השיטות הנ"ל, ניתן להשרות אותה בחומצה גופרתית מרוכזת מדוללת (1:1) למשך 1-2 דקות, או להרתיח אותה בתמיסת 1% NaOH למשך מספר דקות, לשטוף מספר פעמים במים מזוקקים, ולאחר מכן להתייבש באתנול נטול מים לשימוש מאוחר יותר.
