מד PH - קביעה והתאמה של pH בינוני
כל המיקרואורגניזמים מושפעים מה-pH של הסביבה בה הם חיים. לעתים קרובות, נוכחותם של מינים סלקטיביים מצמצמת את טווח ה-pH שבו הם גדלים. לפעמים, החומציות או הבסיסיות של המדיום יכולים לשמש גם כגורם בחירת גדילה. עם זאת, עבור מדיות בדיקה ביוכימיות, טווח ה-pH בו מיקרואורגניזמים מפגינים פעילות tk במצע צר יותר מטווח ה-pH הנדרש לצמיחה: לכן, חשוב להתאים את ה-pH של המדיה לטווח הצפוי. כאשר המעבדה מכינה את המדיום לפי הרכב המדיום, יש לבדוק ולהתאים את ה-pH. יש לציין שגם עבור המדיום הסינטטי המיובש המוכן שסופק על ידי היצרן (במיוחד עבור מדיום מיובש מלאי כלשהו), יש למדוד את ה-pH הסופי לאחר הכנת המדיום הניסיוני.
הדרך המדויקת ביותר למדוד את ה-pH של מדיום היא באמצעות מד pH. לפני השימוש, יש לכייל אותו עם תמיסת חיץ סטנדרטית של pH ידוע (בדרך כלל pH הוא 4 עד 7). שטפו את האלקטרודה של מד ה-pH במים מזוקקים וטבלו אותה במצע התרבית שבכוס, ולאחר מכן קראו את ה-pH של מצע התרבית מקנה המידה של מד ה-pH. כל יצרן מספק הוראות הפעלה מפורטות עבור כל סוג מד pH.
בעת הכנת מצע התרבות, ניתן להתאים את ה-PH בקלות על ידי שימוש במד pH עם ערבוב מכני. יש להכין את מצע התרבית במיכל (כגון כוס גדולה) שניתן לערבב ברציפות. או מגנטים עטופים בטפלון. יש להתאים את ה-pH של המדיום המכיל אגר לאחר ההפשרה, מה שנעשה בקלות עם בוחש מגנטי שניתן לחמם. בעת התאמת ה-pH, השתמש בתמיסת חיץ סטנדרטית של pH ידוע כדי לכייל תחילה את מד ה-pH. לאחר מכן הכניסו את האלקטרודה המרוכבת ומדחום ההתנגדות (אם יש) בתווך, הוסיפו לאט כמות מתאימה של חומצה הידרוכלורית ונתרן הידרוקסיד מקצה הכוס הרחק מהאלקטרודה, כך שהמדיום יוכל להגיע ולשמור על ה-pH הנדרש.
פיצוי הטמפרטורה של מד ה-pH צריך לקחת בחשבון את השפעת הטמפרטורה על מערכת האלקטרודות: בחלק מהדילולים והמדיה, ה-pH משתנה במידה ניכרת עם הטמפרטורה. עבור מדיה נוזלית ודילולים, ניתן להתאים ולמדוד את ה-pH בדרך כלל ב-25 מעלות או בטמפרטורה שבה הם משמשים.
יש להתאים את ה-pH של המדיום האגר לאחר ההמסה, וטמפרטורת ההמסה היא מעל 45 מעלות: לכן, יש לקבוע את ה-pH של המדיום המוצק בטמפרטורת השימוש שלו. בשלב זה, יש להשתמש באלקטרודה מורכבת בעלת ראש שטוח, ולכייל באופן ידני את פיצוי הטמפרטורה של מד ה-pH. כאשר מכינים את מצע התרבית, אם נקבע שה-pH של מצע התרבות שונה בין מצב ההיתוך למצב ההתמצקות, זה אומר שיש טעות בהתאמת ה-pH.
באופן דומה, כאשר המדיום המוכן עובר עיקור בחום (למשל, בחיטוי), הוא עשוי גם לעבור שינויים ב-pH. עבור המדיום המיובש, היצרן לקח זאת בחשבון, ובדרך כלל אין צורך להתאים את ה-pH, אך יש לבדוק היטב את ה-pH של המדיום שבו יש להשתמש. אם יש להתאים את ה-pH של המדיום אגר מיובש במהלך ההמסה מחדש או ההכנה, עדיף להתאים אותו עם חומצה הידרוכלורית מעוקרת מסנן ותמיסת נתרן הידרוקסיד לאחר שלב העיקור כדי למנוע היווצרות של התחממות יתר של המדיום. בעת הכנת מדיה עם חומרי גלם שונים או תרופות, יש לבדוק את ה-pH של המדיה לאחר חיטוי. בנוסף, אם נמצא שה-pH של המדיום משתנה זהה לאחר כל חיטוי, ניתן להתאים את ה-pH כראוי בעת הכנת המדיום. עם זאת, עדיין יש צורך לקבוע את ה-pH הסופי של המדיום לאחר עיקור.
