מדידת כמות חיידקים - שיטת ספירה ישירה מיקרוסקופית!
גידול אוכלוסיות חיידקים מתאפיין בעלייה במספר התאים או בעלייה בחומר הסלולרי. ישנן מספר שיטות למדידת מספרי תאים, כולל ספירה מיקרוסקופית ישירה, ספירת לוחות, טורבומטריה באמצעות ספקטרופוטומטר, מספר MPN הסביר ביותר וסינון ממברנה. השיטות למדידת חומרים תאיים כוללות מדידת משקל יבש של התא, מדידת תכולת רכיבים מסוימים של תאים כמו חנקן, RNA ו-DNA ומדידת תוצרים מטבוליים. לסיכום, ישנן שיטות רבות למדידת גידול חיידקים, לכל אחת יתרונות וחסרונות משלה, והבחירה צריכה להתבסס על דרישות ספציפיות בעבודה. ניסוי זה מציג בעיקר את שיטת הספירה הישירה של המיקרוסקופ הנפוצה בייצור ובמחקר מדעי.
דרישות מטרה
1. הבהירו את עקרון השימוש בלוח ספירת תאי דם לספירה.
2. לשלוט בשיטת השימוש בלוח ספירת תאי דם לספירת חיידקים.
2, עקרונות יסוד
שיטת ספירה ישירה מיקרוסקופית היא שיטה פשוטה, מהירה ואינטואיטיבית לספירה ישירה של כמות קטנה של תרחיף של דגימה מתחת למיקרוסקופ על ידי הנחתה על שקף זכוכית מיוחד עם שטח ונפח מסוימים (המכונה גם מונה חיידקים). כיום, מכשירי ספירת חיידקים הנפוצים בארץ ובחו"ל כוללים לוחות לספירת תאי דם, מכשירי ספירת חיידקים של פיטרוף האוזר ומכשירי ספירת חיידקים של הוקסלי, אשר כולם יכולים לשמש לספירת תרחיפים של שמרים, חיידקים, נבגי פטריות וכו'. עם אותו עיקרון בסיסי. לשני הסוגים האחרונים של מוני חיידקים יש נפח כולל של {{0}}.02mm3 לאחר כיסוי בזכוכית כיסוי, והמרחק בין זכוכית הכיסוי לשקופית המוביל הוא 0.02mm בלבד. לכן, ניתן להשתמש במטרת טבילת שמן כדי לצפות ולספור תאים קטנים יותר כמו חיידקים. בנוסף לשימוש במוני חיידקים אלו, קיימת גם שיטת הערכה לצפייה ישירה ביחס בין שטח המריחה לשטח השדה במיקרוסקופ, המשמשת בדרך כלל לבדיקה בקטריולוגית של חלב. היתרונות של ספירה ישירה במיקרוסקופ הם אינטואיטיביים, מהירים וקלים לתפעול. אבל החיסרון של שיטה זו הוא שהתוצאות הנמדדות הן בדרך כלל סכום של תאים מתים וחיים. נכון להיום, ישנן כמה שיטות שיכולות להתגבר על החיסרון הזה, כמו שילוב של תרבית צביעה של תאים חיים (זמן קצר) והוספת מעכבי חלוקת תאים כדי להשיג את המטרה של ספירת תאים חיים בלבד.
שימוש בלוח ספירת תאי דם כדוגמה לספירה ישירה במיקרוסקופ. את שיטות השימוש של שני מונים החיידקים האחרים ניתן למצוא במדריכים של יצרנים שונים. ספירה ישירה תחת מיקרוסקופ באמצעות לוחית ספירת תאי דם היא שיטה נפוצה לספירת חיידקים. לוח הספירה הוא מגלשת זכוכית שנעשתה במיוחד עם ארבעה חריצים היוצרים עליו שלוש פלטפורמות; הפלטפורמה הרחבה יותר באמצע מחולקת לשני חצאים על ידי חריץ אופקי קצר, ויש רשת בכל צד של הבמה. כל רשת מחולקת לתשע רשתות גדולות, והרשת הגדולה באמצע היא חדר הספירה. מבנה לוחית ספירת תאי הדם מוצג באיור l{{0}}. לקנה המידה של חדר הספירה יש בדרך כלל שני מפרטים. האחת היא שריבוע גדול מחולק ל-25 ריבועים אמצעיים, וכל ריבוע מחולק עוד יותר ל-16 ריבועים קטנים (איור 15-2); שיטה נוספת היא לחלק ריבוע גדול ל-16 ריבועים אמצעיים, וכל ריבוע מתחלק עוד יותר ל-25 ריבועים קטנים. עם זאת, ללא קשר לגודל לוח הספירה, יש 400 ריבועים קטנים בכל ריבוע גדול. אם אורך הצלע של כל ריבוע הוא 1 מ"מ, השטח של כל ריבוע גדול הוא lmm2. לאחר כיסוי בזכוכית כיסוי, הגובה בין זכוכית הכיסוי למגלשה הוא 0.1 מ"מ, כך שנפח חדר הספירה הוא 0.1 מ"מ (אלפית מיליליטר). איור 15-1 מבנה לוח ספירת תאי דם (I) איור 15-2 מבנה לוח ספירת תאי דם (II) מבט מלפנים; ב. תצוגת חתך אנכי; לרשת המוגדלת יש ריבוע גדול באמצע כמו חדר הספירה 1. לוח ספירת תאי דם; 2. מכסים זכוכית; בספירה בחדר הספירה, ספירת החיידקים הכוללת מחושבת בדרך כלל עבור חמישה ריבועים, ואז מתקבל הערך הממוצע של כל ריבוע, כפול 25 או 16 כדי לקבל את ספירת החיידקים הכוללת בריבוע גדול, אשר לאחר מכן מומר ל- ספירת חיידקים כוללת בתמיסת החיידקים lml. בהנחה שספירת החיידקים הכוללת בחמש רשתות מרובעות היא A וגורם הדילול של תמיסת החיידקים הוא B. אם יש 25 לוחות ספירה ברשת הריבועית, ספירת החיידקים הכוללת ב-1 מ"ל של תמיסה חיידקית היא A/5 × 25 × 104 ב ב
