מבוא לבחירה בין מיקרוסקופים הפוכים למיקרוסקופים פלואורסצנטיים
מיקרוסקופ הוא מכשיר חשוב בתרבית תאים ובניסויים נגזרות קשורים. כיום קיימים סוגים שונים של מיקרוסקופים בשוק, ובחירת מיקרוסקופ העונה על הצרכים ומתאים מהווה אתגר. להלן, נציג את העקרונות של מיקרוסקופים הפוכים ומיקרוסקופים פלואורסצנטיים לבחירה קלה.
הרכבו של מיקרוסקופ הפוך זהה לזה של מיקרוסקופ רגיל, המורכב בעיקר משלושה חלקים: חלק מכני, חלק הארה וחלק אופטי. ההרכב של מיקרוסקופ הפוך זהה למיקרוסקופ זקוף רגיל, אלא שעדשת האובייקט ומערכת התאורה הפוכים, כשהראשון מתחת לבמה והשני מעל הבמה. מבנה זה מאפשר הגדלה משמעותית של המרחק האפקטיבי בין מערכת מיקוד התאורה לבמה, מה שמקל על הצבת מכשירי תצפית עבים יותר כמו צלחות תרבית ובקבוקי תרבית תאים (כמובן שגם שקופיות זכוכית מקובלות), בעוד שמרחק העבודה בין עדשת האובייקטיב לחומר אינו צריך להיות גדול במיוחד. מיקרוסקופ הפוך משמש מוסדות רפואיים ובריאותיים, אוניברסיטאות ומכוני מחקר לצפייה במיקרואורגניזמים, תאים, חיידקים, תרבית רקמות, תרחיפים, משקעים וכו'. הוא יכול לצפות ברציפות בתהליך של רבייה וחלוקה של תאים וחיידקים במצע התרבות, ויכול לתפוס כל מצב במהלך תהליך זה. בשימוש נרחב בתחומים כמו ציטולוגיה, טפילולוגיה, אונקולוגיה, אימונולוגיה, הנדסה גנטית, מיקרוביולוגיה תעשייתית, בוטניקה וכו'.
מיקרוסקופ פלואורסצנטי משמש לחקר הספיגה, ההובלה, ההפצה והלוקליזציה של חומרים בתוך תאים. עבור האובייקט שנבדק, ישנן שתי דרכים ליצור פלואורסצנטי: פלואורסצנטי ספונטני, אשר פולט ישירות פלואורסצנטי לאחר קרינת UV; הקרינה המשנית מתרחשת כאשר האובייקט הנצפה מטופל בצבעי פלורסנט ולאחר מכן מוקרנים באור אולטרה סגול כדי לפלוט פלואורסצנטיות. חומרים מסוימים בתאים, כמו כלורופיל, מייצרים פלואורסצנטי ספונטני כאשר הם נחשפים לקרינה אולטרה סגולה; חלק מהחומרים עצמם אינם יכולים לפלוט פלואורסצנטי, אך אם הם מוכתמים בצבעי פלורסנט או נוגדנים פלואורסצנטיים, הם יכולים גם לפלוט פלואורסצנטיות משנית לאחר שהוקרנו באור אולטרה סגול. מיקרוסקופ פלואורסצנטי משתמש במקור אור נקודתי יעיל ביותר כדי לפלוט אורך גל מסוים של אור (אור אולטרה סגול 365 ננומטר או אור כחול סגול 420 ננומטר) דרך מערכת סינון צבע כאור עירור, אשר מעורר את החומרים הפלורסנטים בתוך הדגימה כדי לפלוט צבעים שונים של הקרינה דרך האובייקט ולאחר מכן התבוננות בהגדלה של העין. באופן זה, גם עם הקרינה חלשה ברקע חזק, קל לזהות אותו ובעל רגישות גבוהה. הוא משמש בעיקר לחקר מבנה התא, תפקוד והרכב כימי.
