כיצד תוכל לבחור את המיקרוסקופ הקונפוקאלי המתאים לך? האם יש שיטה ספציפית?
למיקרוסקופיה קונפוקלית יש יותר יתרונות ממיקרוסקופיה רחבה. מיקרוסקופיה קונפוקלית יכולה לבצע חתך אופטי רציף של דגימות ולא לכלול הפרעות אות ממישורים לא מוקדיים. מסיבה זו, היישום של מיקרוסקופיה קונפוקלית אכן נפוץ יותר. עם זאת, ישנם יותר ויותר מיקרוסקופים קונפוקלים בשוק. איך לבחור?
למיקרוסקופיה קונפוקלית יש יותר יתרונות ממיקרוסקופיה רחבה. מיקרוסקופיה קונפוקלית יכולה ליצור קטעים אופטיים רציפים של דגימות ולא לכלול הפרעות אות ממישורים לא מוקדיים. מסיבה זו, מיקרוסקופיה קונפוקלית אכן נפוצה יותר. עם זאת, ישנם יותר ויותר מיקרוסקופים קונפוקלים בשוק. איך לבחור? בעת בחירת מיקרוסקופ קונפוקאלי, ישנם שני שיקולים בסיסיים וחשובים: סוג הדגימה שברצונך לחקור (למשל, תאים קבועים או חיים), וסוג הבדיקה שברצונך לבצע (למשל, תהליכים תאיים סטטיים או דינמיים).
הדמיה קונפוקלית של תאים קבועים
כדי לצלם תאים או רקמות קבועים ומוכתמים, אנו בוחרים בדרך כלל בסריקת לייזר קונפוקלית (LSCM). זה בעיקר בגלל שלתאים מתים קבועים חסרים אירועים ביולוגיים מהירים בתאים חיים והם יכולים להפיק תועלת טובה יותר מהרזולוציה המרחבית הגבוהה יותר של LSCM. הדמיית LSCM היא לחתוך אופטי את הדגימה על ידי לייזר, ומהירות הסריקה (בהתאם למהירות המראה של מערך הסריקה) היא בדרך כלל 1fps. זמני חשיפה ארוכים יותר פירושם סיכון גדול יותר להלבנת צילום, אך עבור תאים מתים קבועים זמן אינו קריטי ואנו יכולים לבצע ממוצעים על ידי צילום מספר תמונות.
הדמיה קונפוקלית של תאים חיים
הדמיה של תאים חיים דורשת הגנה נוספת מפני סביבות לא ידידותיות. בעת הדמיה, השיקול הראשון שלנו הוא לשמור על כדאיות התא ובריאותו. גופי חימום בטמפרטורה קבועה ומערכות זילוף חיוניים, במיוחד עבור מחקרים של זמן-lapse. האירועים הביוכימיים המהירים השולטים במצב הפיזיולוגי של תאים חיים הם מה שרוב האנשים רוצים לחקור, אבל אירועים אלה מהירים מדי עבור LSCM קונבנציונלי. בנוסף, חשיפה ממושכת ל-LSCM גרמה גם לנזק אור רעיל לתאים. לכן, הדמיה של תאים חיים דורשת מיקרוסקופים קונפוקאליים מיוחדים.
יש בדרך כלל שתי אפשרויות להדמיה קונפוקלית של תאים חיים: סריקה מהירה של קונפוקלים של סריקת לייזר וקונפוקלים של דיסק מסתובב. מיקרוסקופיה קונפוקלית סריקה מהירה מחליפה מראות גלוונומטרים איטיות יותר במראות סריקה תהודה מהירות יותר, המאפשרת מהירויות סריקה של עד 30fps; בעוד שלקונפוקאלי דיסק מסתובב (SDCMs) יש את היתרון של סריקה מהירה יותר (אם כי בהכרח עם אובדן רזולוציה מרחבית), המהירות שלו יכולה להגיע תיאורטית ל-2000fps (בפועל היא מוגבלת לרוב על ידי גורמים אחרים).
אם אתה מודאג מהלבנה פוטולוגית או אות פלואורסצנטי חלש מאוד, אז SDCM עשוי להיות מתאים יותר. SDCM משתמש בשני דיסקים מסתובבים עם מיקרו-בארות ערוכים כדי לפזר את אור העירור. בניגוד ל-LSCM, שסורקת את נקודת הדגימה, SDCM רוכש מספר נקודות בו-זמנית (כ-100 נקודות פיקסלים), כך שהמהירות מוגברת מאוד, והלבנת הפוטו של SDCM ופחות פוטו-רעילות. עם זאת, אתה יכול גם להשתמש בקונפוקלים סריקה מהירה כדי להגביר את מהירות הסריקה, בשילוב עם גלאים רגישים ביותר, ולהפחית אנרגיית אור עירור כדי להפחית את הפוטו-רעילות, מה שיכול לשמור על הפונקציות העשירות של קונפוקלים מסורתיים.
מערכת הדמיה קונפוקלית אוטומטית
יש חוקרים שאוהבים למצוא דרכים לשנות את המיקרוסקופ כך שיתאים לצרכים האישיים שלהם. וכמה חוקרים אפילו לא מתעניינים איך מיקרוסקופים פועלים בפועל. עבור האחרונים, מיקרוסקופ קונפוקאלי אוטומטי עשוי להיות יותר לטעמם. לדוגמה, ה-Olympus FluoViewFV10i הוא מיקרוסקופ לייזר קונפוקאלי 4-לשולחן עבודה אוטומטי לחלוטין. המבנה המשולב הקומפקטי שלו אינו דורש כמעט מקום התקנה. סוג זה של מכשיר אידיאלי עבור חוקרים שצריכים לבצע הרבה רכישת נתוני תמונה בכל יום, אך כמובן שהם אינם משקפים במלואם את הפונקציונליות והגמישות של קונפוקלים מסורתיים. בנוסף, ה-NikonA1 היא גם מערכת קונפוקל אוטומטית לחלוטין. כמו רוב מיקרוסקופי הסריקה הקונפוקאליים הקונבנציונליים, ה-NikonA1 משתמש בראש סריקה גלוונומטר, בעל רזולוציה גבוהה יותר מה-A1R עם ראש סריקה היברידי, אך מהירות מעט יותר איטית (A1R ~30fps)
