שיטת זיהוי מיקרוסקופ פלואורסצנטי
מיקרוסקופ פלואורסצנטי
מיקרוסקופיה פלואורסצנטית היא כלי בסיסי לציטוכימיה של אימונופלואורסצנטי. הוא מורכב ממרכיבים עיקריים כגון מקור אור, מערכת לוחות סינון ומערכת אופטית. הוא משתמש באורך גל מסוים של אור כדי לעורר את הדגימה ולפלוט פלואורסצנציה, המוגדלת באמצעות מערכת אובייקטיבית ועינית כדי לצפות בתמונת הקרינה של הדגימה (איור 1).
(1) מקור אור
כיום, מנורת כספית בלחץ גבוה במיוחד של 200W משמשת בדרך כלל כמקור האור. הוא עשוי מזכוכית קוורץ, עם צורה כדורית באמצע ובתוכו כמות מסוימת של כספית. במהלך הפעולה, הפריקה בין שתי האלקטרודות גורמת לאידוי הכספית, והלחץ בתוך הכדור עולה במהירות. כאשר הכספית מתאדה לחלוטין, היא יכולה להגיע ללחצים אטמוספריים סטנדרטיים של 50-70, אשר בדרך כלל לוקח בערך 5-15 דקות. הארה של מנורות כספית בלחץ גבוה במיוחד היא תוצאה של פריקה בין אלקטרודות, אשר מתנתקת באופן רציף ומפחיתה מולקולות כספית ופולטת פוטונים. הוא פולט אור אולטרה סגול וסגול כחול חזק, אשר מספיק כדי לעורר חומרים פלורסנטים שונים, ולכן הוא נמצא בשימוש נרחב במיקרוסקופים פלואורסצנטיים.
אמצעי זהירות לשימוש במיקרוסקופ פלואורסצנטי
(1) עקבו בקפדנות אחר ההוראות של מפעל מיקרוסקופ הקרינה ואל תשנה את התוכנית באופן שרירותי.
(2) הבדיקה צריכה להתבצע בחדר חשוך. לאחר הכניסה לחדר החושך, חבר את החשמל והדלק את מנורת הכספית בלחץ גבוה במיוחד למשך 5-15 דקות. לאחר שמקור האור פולט אור חזק ומתייצב, העיניים צריכות להסתגל במלואן לחדר החושך לפני שמתחילים לצפות בדגימה.
(3) כדי למנוע נזק UV לעיניים, יש להרכיב משקפי מגן בעת התאמת מקור האור.
(4) זמן הבדיקה צריך להיות 1-2 שעות בכל פעם. אם הוא עולה על 90 דקות, עוצמת האור של מנורת הכספית בלחץ גבוה יורדת בהדרגה והפלורסצנטיות נחלשת; דגימות שנחשפו לקרינה אולטרה סגולה במשך 3-5 ימים
לאחר דקה, גם הקרינה ירדה באופן משמעותי; לכן, משך הזמן המרבי לא יעלה על 2-3 שעות.
(5) תוחלת החיים של מקור האור במיקרוסקופ פלואורסצנטי מוגבלת, ויש לבחון את הדגימה באופן מרכזי כדי לחסוך זמן
חסוך זמן והגן על מקור האור. כשמזג האוויר חם יש להוסיף מאוורר חשמלי כדי להפיג חום ולהתקרר. בהחלפת נורה חדשה יש לרשום את זמן השימוש מההתחלה. כאשר האור כבוי ואתה רוצה להשתמש בו שוב, עליך להמתין עד שהנורה תתקרר מספיק לפני הדלקתה. הימנע מהדלקת מקור האור מספר פעמים ביום.
(6) התבונן בדגימה מיד לאחר הצביעה, שכן הקרינה תיחלש בהדרגה עם הזמן. אם הדגימה מאוחסנת בשקית ניילון מפוליאתילן ב-4 מעלות, היא יכולה לעכב את זמן הנחתת הקרינה ולמנוע את אידוי חומר ההרכבה.
(7) קריטריוני השיפוט לבהירות הקרינה מחולקים בדרך כלל לארבע רמות, דהיינו "אחת" - קרינה חלשה ללא או נראית לעין. "+" - רק הקרינה הנראית לעין. ++- גלוי עם פלואורסצנטי בהיר. "+++" - פלואורסצנטי גלוי ומסנוור.
