יישום ושימוש בעיקרון של מיקרוסקופ פלואורסצנטי
(1) המאפיינים העקרוניים והמבניים של מיקרוסקופ הקרינה: מיקרוסקופ הקרינה משתמש במקור אור נקודתי בעל יעילות אור גבוהה כדי לפלוט אור באורך גל מסוים (כגון אור אולטרה סגול 3650 אינץ' או אור כחול סגול 4200 אינץ') דרך מערכת הסינון. כאור העירור כדי לרגש את הדגימה. לאחר שהחומר הפלורסנטי בפנים פולט פלואורסצנטיות בצבעים שונים, הוא נצפה באמצעות הגדלה של עדשת המטרה והעינית. בצורה זו, ברקע ניגודיות חזקה, גם אם הקרינה חלשה מאוד, קל לזהות אותה ובעלת רגישות גבוהה. הוא משמש בעיקר למחקר של מבנה ותפקוד התא והרכב כימי. המבנה הבסיסי של מיקרוסקופ פלואורסצנטי מורכב ממיקרוסקופ אופטי רגיל בתוספת כמה אביזרים (כגון מקור אור ניאון, מסנן עירור, מפצל אלומה דו-צבעוני ומסנן חוסם וכו'). מקור אור ניאון - בדרך כלל השתמש במנורת כספית בלחץ גבוה במיוחד (50-200W), שיכולה לפלוט אור באורכי גל שונים, אבל לכל חומר ניאון יש אורך גל עירור שמייצר את הקרינה החזקה ביותר, ולכן מסנן עירור (בדרך כלל, ישנם מסנני עירור אולטרה סגול, סגול, כחול וירוק), המאפשרים רק לאור עירור באורך גל מסוים לעבור ולהקרין את הדגימה, תוך כדי קליטת אור אחר. לאחר שכל חומר מוקרן באור עירור, הוא פולט פלואורסצנטיות גלויות עם אורך גל ארוך יותר מאורך הגל של הקרינה תוך זמן קצר מאוד. הקרינה היא ספציפית ובדרך כלל חלשה יותר מאור עירור. על מנת לצפות בקרינה ספציפית, נדרש מסנן חוסם (או מדכא) מאחורי עדשת המטרה. יש לו שני תפקידים: האחד הוא לספוג ולחסום את אור העירור מלהיכנס לעינית, כדי לא להפריע לקרינה ולפגוע בעיניים; השני הוא לבחור ולתת לפריחה הספציפית לעבור, להראות צבע פלואורסצנטי ספציפי. יש להשתמש בשני המסננים יחד.
ישנם שני סוגים של מיקרוסקופים פלואורסצנטיים מבחינת הנתיבים האופטיים שלהם:
1. מיקרוסקופ פלואורסצנטי שידור: מקור אור העירור מועבר דרך חומר הדגימה דרך עדשת מעבה כדי לעורר פלואורסצנטיות. מקובל להשתמש בקולט שדה כהה, וניתן להשתמש בקולט רגיל גם כדי לכוונן את המראה כך שאור העירור יופנה מחדש ויעקוף אל הדגימה. זהו מיקרוסקופ פלורסנט ישן יותר. היתרון הוא שהקרינה חזקה בהגדלה נמוכה, אך החיסרון הוא שהקרינה יורדת עם עליית ההגדלה. לכן, עדיף להתבונן בחומרי דגימה גדולים יותר.
2. מיקרוסקופ אפי פלואורסצנטי הוא סוג חדש של מיקרוסקופ פלואורסצנטי שפותח בתקופה המודרנית. ההבדל הוא שאור העירור נופל מעדשת האובייקטיב אל פני הדגימה, כלומר, אותה עדשת אובייקטיבית משמשת כמעבה הארה ועדשת האובייקטיב לאיסוף הקרינה. יש להוסיף מפצל אלומה דיכרואי בנתיב האור, שנמצא במרחק של 45 מעלות מהאורניום הקל. אור העירור מוחזר לתוך עדשת המטרה ונאסף על המדגם. הקרינה הנוצרת על ידי הדגימה ואור העירור המוחזר על ידי משטח העדשה של עדשת האובייקט ומשטח זכוכית הכיסוי נכנסים לעדשת האובייקטיבית בו זמנית, וחוזרים למפצל האלומה הדו-צבעוני כדי להפוך את אור העירור להפרדה מהפלורסנטיות. , אור עירור שיורי נספג על ידי מסננים חוסמים. כמו שינוי לשילוב של מסנן עירור שונה/מפצל אלומה בשני צבעים/מסנן חסימה, זה יכול לענות על הצרכים של מוצרי תגובה פלורסנטיים שונים. היתרון של מיקרוסקופ פלואורסצנטי מסוג זה הוא שההארה של שדה הראייה אחידה, ההדמיה ברורה וככל שההגדלה גדולה יותר כך הקרינה חזקה יותר.
(2) כיצד להשתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי.
1. הפעל את מקור האור, ומנורת הכספית בלחץ גבוה במיוחד צריכה להתחמם במשך כמה דקות כדי להגיע לנקודה הבהירה ביותר.
2. מיקרוסקופ פלואורסצנטי השידור צריך להתקין את מסנן העירור הנדרש בין מקור האור למעבה, ולהתקין את מסנן החסימה המתאים מאחורי עדשת האובייקטיב. מיקרוסקופים אפי פלואורסצנטי צריכים להכניס את מסנן העירור הנדרש/מפצל קרן דו-צבע/מסנן חוסם מכניסים לתוך החריצים בנתיב האור.
3. התבוננו בעדשה בהגדלה נמוכה, והתאם את מרכז מקור האור כך שימוקם במרכז נקודת ההארה כולה לפי מכשיר ההתאמה של דגמים שונים של מיקרוסקופים פלואורסצנטיים.
4. הנח את חתיכת הדגימה והתבונן לאחר ההתמקדות. יש לשים לב במהלך השימוש: אין להתבונן ישירות עם מסנן הקצה, כדי לא לגרום נזק לעיניים; בעת התבוננות בדגימות עם עדשת שמן, יש להשתמש בעדשת שמן מיוחדת ללא פלואורסצנטי; לאחר כיבוי מנורת הכספית בלחץ גבוה, לא ניתן להדליק אותה שוב מיד, יש לבדוק אותה. ניתן להפעיל אותו מחדש לאחר 5 דקות, אחרת הוא יהיה לא יציב וישפיע על חיי מנורת הכספית.
(3) התבוננו בתאים המוכתמים ב-0.01% צבע ניאון כתום אקרידין תחת המיקרוסקופ הפלורסנטי בפלטפורמת ההוראה עם מסנן אור כחול-סגול. הגרעין והציטופלזמה מתרגשים לייצר שני צבעים שונים של פלואורסצנטי (ירוק כהה וכתום-אדום).
