ההבדל בין מיקרוסקופ פלואורסצנטי למיקרוסקופ אופטי רגיל
ההבדל בין מיקרוסקופ פלואורסצנטי למיקרוסקופ אופטי רגיל, מיקרוסקופ פלואורסצנטי ומיקרוסקופ אופטי רגיל שונה, זה לא באמצעות הארה של מקור האור הרגיל כדי לצפות בדגימה, אלא שימוש באורך גל מסוים של אור (בדרך כלל אולטרה סגול, כחול-סגול) עירור של הדגימה מתחת למיקרוסקופ בתוך החומר הפלורסנטי, כך שהיא פולטת אור פלואורסצנטי, ולכן תפקידו של מיקרוסקופ הפלורסצנטי במקור האור אינו תאורה ישירה, אלא כסוג של גירוי של דגימות הקרינה הפנימית. מקור מיקרוסקופ הקרינה אינו הארה ישירה, אלא כמקור אנרגיה לגירוי החומר הפלורסנטי בתוך הדגימה. הסיבה לכך שאנו יכולים לצפות בדגימה אינה נובעת מהארת מקור האור, אלא תופעת הקרינה שמציג החומר הפלורסצנטי בדגימה לאחר ספיגת אנרגיית האור הנרגשת. ניתן לראות שהמאפיינים של מיקרוסקופ הקרינה הם בעיקר שמקור האור שלו יכול לספק מספר רב של טווחי אורכי גל ספציפיים של אור עירור, כך שהחומרים הפלורסנטים בתוך הדגימה הנבדקת יכולים לקבל את העוצמה הדרושה של אור עירור. יחד עם זאת, מיקרוסקופ הקרינה חייב להיות בעל מערכת סינון מתאימה. מיקרוסקופ הקרינה הוא הכלי הבסיסי להיסטוכימיה של פלואורסצנציה. הוא מורכב ממקור אור בלחץ גבוה במיוחד, מערכת סינון (כולל פלטת סינון עירור ודיכוי), מערכת אופטית ומערכת צילום ורכיבים עיקריים אחרים, הוא השימוש באורך גל מסוים של אור כדי לעורר את הדגימה לפלוט פלואורסצנטיות.
1. דרך עירור הקרינה: על פי טווח אורכי הגל של האור מתחלק לשיטת עירור UV (באמצעות תאורה אולטרה סגולה) ושיטת עירור BV (שימוש באור סגול כחול) שני סוגים של שיטת עירור UV קצרה מ-400 ננומטר ליד אור אולטרה סגול עבור עִירוּר. אין אור עירור גלוי בשיטה זו, ולכן הקרינה הנצפית מראה את הקרינה המובנית של הצבע, וקל להבחין בין הקרינה הספציפית על הדגימה לבין הקרינה העצמית של רקמת הרקע.
2. שיטת עירור BV: השיטה מתרכזת ב-404nm, 434nm מאור אולטרה סגול לכחול לעירור. שיטה זו משתמשת באור כחול כדי להקרין את הדגימה, ולכן מסנן הניתוק של מערכת תצפית הקרינה חייב להשתמש במסנן שיכול לחסום לחלוטין את האור הכחול ולעבור במלואו את הקרינה הירוקה והצהובה הרצויה. פיגמנטים פלואורסצנטיים לשיטת נוגדנים פלורסנטיים. מכיוון שאורך הגל של הקליטה המקסימלית של אור העירור ואורך הגל של הפליטה המקסימלית של הקרינה קרובים זה לזה, המסננים המשמשים בשיטת עירור BV חייבים להיות מסנני חתך חדים. שיטה זו משתמשת באור כחול כאור העירור, כך שיעילות הספיגה של הפלואורוכרום גבוהה יותר וניתן לקבל תמונה בהירה יותר. החיסרון הוא שלא ניתן לראות פלואורסצנציה מתחת ל-500 ננומטר, ומעל 500 ננומטר כל התמונה נראית צהובה. בשיטת הנוגדנים הפלורסנטיים, רוב הספציפיות נשפטת לפי הצבע הייחודי לפלואורוכרום, ולכן החסרונות של שיטת עירור BV המתוארת לעיל נוטים להיות משפיעים ביותר כאשר דנים בספציפיות עדינה.
