קביעת מספר המיקרואורגניזמים - שיטת ספירה ישירה מיקרוסקופית!
בסיסי
שיטת ספירה ישירה מיקרוסקופית היא שיטה פשוטה, מהירה ואינטואיטיבית של הנחת כמות קטנה מהתרחיף של הדגימה לבדיקה על שקף זכוכית מיוחד (המכונה גם מונה חיידקים) עם שטח ונפח מוגדרים, וספירה ישירות מתחת. מיקרוסקופ. כיום, מוני החיידקים הנפוצים בארץ ובחו"ל כוללים: לוח ספירת תאי דם, מונה חיידקי Peteroff-Hauser ומונה חיידקי הוקסלי ועוד. כולם יכולים לשמש לספירת תרחיפים כגון שמרים, חיידקים ונבגי עובש, וכן העקרונות הבסיסיים זהים. לשני מונים החיידקים האחרונים יש נפח כולל של 0.02 מ"מ לאחר כיסוי בזכוכית כיסוי, והמרחק בין זכוכית הכיסוי לשקופית הוא רק 0.02 מ"מ, כך שתאים קטנים כגון ניתן לצפות בחיידקים ולספור אותם באמצעות עדשת אובייקטיבי טבילה בשמן. בנוסף לשימוש במוני חיידקים אלו, ישנה גם שיטת הערכה של צפייה ישירה ביחס בין שטח המריחה לאזור שדה הראייה במיקרוסקופ. שיטה זו משמשת בדרך כלל לבדיקה בקטריולוגית של חלב. היתרון של שיטת הספירה הישירה במיקרוסקופ הוא בכך שהיא אינטואיטיבית, מהירה וקלה לתפעול. אבל החיסרון בשיטה זו הוא שהתוצאות הנמדדות הן בדרך כלל סכום של חיידקים מתים וחיים. נכון להיום, ישנן כמה שיטות להתגבר על חסרון זה, כמו שילוב של חיידקים חיים צובעים תרבית מיקרו-תא (זמן קצר) והוספת מעכבי חלוקת תאים כדי להשיג את המטרה של ספירת חיידקים חיים בלבד.
בניסוי זה השתמשו בהמוציטומטר כדוגמה לביצוע ספירה ישירה תחת מיקרוסקופ. לשיטות השימוש של שני מוני החיידקים האחרים, עיין בהוראות של כל יצרן. ספירה ישירה תחת מיקרוסקופ עם המוציטומטר היא שיטת ספירה מיקרוביאלית נפוצה. לוח הספירה הוא מגלשת זכוכית שנעשתה במיוחד, שעליה ארבעה חריצים יוצרים שלוש במות; הפלטפורמה הרחבה יותר באמצע מחולקת לשני חצאים על ידי חריץ אופקי קצר, וכל צד של הפלטפורמה מרופד ברשת. כל רשת מחולקת לתשעה ריבועים גדולים, והריבוע הגדול האמצעי הוא תא הספירה. לקנה המידה של חדר הספירה יש בדרך כלל שני מפרטים, האחד הוא שריבוע גדול מחולק ל-25 ריבועים אמצעיים, וכל ריבוע אמצעי מחולק ל-16 ריבועים קטנים; השני הוא שריבוע גדול מחולק ל-16 ריבועים אמצעיים, וכל ריבוע אמצעי מחולק ל-25 ריבועים קטנים, אבל לא משנה איזה סוג לוח ספירה, יש 400 ריבועים קטנים ב כל ריבוע גדול. אורך הצלע של כל ריבוע גדול הוא 1 מ"מ, ואז השטח של כל ריבוע גדול הוא 1 מ"מ 2. לאחר כיסוי זכוכית הכיסוי, הגובה בין זכוכית הכיסוי לזכוכית השקופית הוא 0.1 מ"מ, כך שנפח הכיסוי תא הספירה הוא 0.1 מ"מ (עשרת אלפית המיליליטר).
