קביעת אוכלוסיית חיידקים - שיטת ספירה מיקרוסקופית ישירה!
I. דרישות מטרה
1, כדי להבהיר את העיקרון של ספירת צלחות המטוקריט.
2, לשלוט בשיטת ספירת החיידקים באמצעות צלחת המטוקריט.
II. עקרונות בסיסיים
שיטת ספירה ישירה במיקרוסקופ היא כמות קטנה של תרחיף של הדגימה לבדיקה על שקף מיוחד עם שטח ונפח מוגדרים (הידוע גם כמונה בקטריולוגי), במיקרוסקופ ספירה ישירה בשיטה פשוטה, מהירה ואינטואיטיבית. כיום, מונים בקטריולוגיים מקומיים וזרים בשימוש נפוץ הם: לוח ספירת תאי דם, מונים בקטריולוגיים Peteroff-Hauser ומונים בקטריולוגיים של Hawksley וכו', שיכולים לשמש עבור שמרים, חיידקים, נבגי עובש והשעיות ספירה אחרות, העיקרון הבסיסי אותו הדבר. לשני סוגי המונים האחרונים יש נפח כולל של 0.02 מ"מ לאחר הנחת הכיסוי, והמרחק בין כיסוי הכיסוי לפרוסת המוביל הוא רק 0.02 מ"מ, כך שתאים קטנים יותר כגון ניתן לצפות בחיידקים ולספור אותם באמצעות מטרת טבילת שמן. בנוסף לשימוש במונים אלו, קיימת גם שיטת אומדן של היחס בין שטח המריחה לשדה הראייה הנצפה ישירות מתחת למיקרוסקופ, המשמשת בדרך כלל לבדיקה בקטריולוגית של חלב פרה. היתרונות של שיטת ספירת המיקרוסקופ הישיר הם אינטואיטיביים, מהירים וקלים לתפעול. עם זאת, החיסרון של שיטה זו הוא שהתוצאה היא בדרך כלל סכום של אורגניזמים מתים וחיים. ישנן כמה שיטות להתגבר על החיסרון הזה, כמו שילוב של תרבית מיקרו-תא מוכתמת בחיידקים חיים (זמן קצר) ותוספת של מעכבי ציטוקינזיס כדי להשיג את המטרה של ספירת אורגניזמים חיים בלבד.
שלבי תפעול
1, הכנת השעיה חיידקית
השתמש בתמיסת מלח סטרילית להכנת תרחיף חיידקי של שמרי בירה בריכוז מתאים.
2, תא ספירת מראה
לפני הוספת דגימות, יש לבדוק תחילה את תא הספירה של לוח הספירה. אם יש לכלוך, יש לנקות ולייבש אותו לפני הספירה.
3, הוספת דוגמאות
נקה ויבש צלחת ספירת תאי דם מכוסה בפס כיסוי, ולאחר מכן השתמש בבורטה נימי סטרילית כדי לנער את תרחיף שמרי הבירה מקצה הכיסוי כדי להפיל טיפה קטנה, כך שהנוזל החיידקי לאורך הרווח על ידי חדירת נימי תא ספירה באופן אוטומטי, בדרך כלל ניתן למלא תא ספירה בנוזל חיידקי. בעת נטילת דגימות, תחילה יש לנער היטב את התמיסה החיידקית; בעת הוספת דגימות, תא הספירה לא צריך להיות בועות אוויר.
4, ספירת מיקרוסקופ
לאחר הוספת הדגימה, הניחו לה לנוח למשך 5 דקות, ולאחר מכן הניחו את צלחת ספירת תאי הדם על שלב נושא המיקרוסקופ, מצאו תחילה את המיקום של תא הספירה בהגדלה נמוכה, ולאחר מכן שנה אותו להגדלה גבוהה לספירה. התאם את עוצמת האור של המיקרוסקופ כראוי, שכן המיקרוסקופ עם אור רפלקטור צריך לשים לב שהאור לא צריך להיות מוטה לצד אחד, אחרת שדה הראייה לא קל לנקות את קו רשת הספירה של החדר, או לראות רק את הקו האנכי או לראות רק את הקו האופקי. אם נמצא שהנוזל החיידקי סמיך מדי או דק מדי לפני הספירה, יש צורך להתאים מחדש את הדילול לפני הספירה. דרישות כלליות לדילול דגימות של כ-5 עד 10 חיידקים בכל תא מתאימות. עבור כל תא ספירה, האורגניזמים ב-5 תאים אמצעיים (4 פינות ותא אמצעי אחד במרכז) נבחרים לספירה. האורגניזמים הממוקמים על קווי הרשת נספרים בדרך כלל רק על הקווים העליונים והימניים. במקרה של ניצני שמרים, כאשר הגוף הניצני מגיע למחצית מגודל תא האם, הוא נספר כשני אורגניזמים. ספירת דגימה משני תאי הספירה בערך הממוצע לחישוב תכולת החיידקים של הדגימה.
5. ניקוי צלחת ההמטוקריט
לאחר השימוש, שטפו את לוחית ספירת תאי הדם במים מתחת לברז, אל תשתמש בחפצים קשים לשטיפה ולצחצוח, ייבש אותה בעצמך או השתמש במייבש שיער כדי לייבש אותה לאחר הכביסה. בדוק מיקרוסקופית את הצלחת כדי לראות אם יש שאריות של אורגניזמים או משקעים אחרים בכל תא. אם הוא לא נקי, יש לחזור על הכביסה עד שהיא נקייה.
