שיטות ושלבים לאיתור באגים עבור מיקרוסקופ ניגודיות פאזה
א. על בסיס התאמת מערכת התאורה של Kuhler, השתמש בשיטת השדה הבהיר כדי למקד את המדגם בצורה ברורה;
ב. סובב את הזרקור ל-Ph1 ויישר אותו עם קו קנה המידה בפטיפון. בחר אובייקטיבי ניגודיות 10 x פאזה והחלף אותו בדגימה השקופה שיש לראות;
ג. הסר את אחת העיניות, החלף אותה בטלסקופ מרוכז והתמקד בשתי טבעות הניגודיות בשדה הראייה (טבעת הניגוד השחורה של עדשת האובייקטיב וטבעת הניגודיות של עדשת המעבה);
ד. ייתכן ששתי טבעות ההבדל בשדה הראייה לא בהכרח חופפות. כוונן את שני התקני הכוונון בזרקור (התאמת המצבים השמאלי והימני של טבעות ההפרש עם מוטות כוונון וכפתורי חיכוך לכוונון המצבים הקדמיים והאחוריים), כך שהטבעת השקופה תנוע קדימה ואחורה כדי לחפוף לטבעת השחורה ;
ה. לאחר ההתאמה, עבור חזרה לעינית התצפית ולחץ על המסנן הירוק לנתיב האופטי כדי לצפות בתמונת הבדל הפאזה של הדוגמה;
ו. בעת תצפית עם עדשות 20 x ו- 40 x, יש להגדיר את הזרקור במיקום Ph2, ובשימוש בעדשת אובייקטיבית 100 x, יש להגדיר את הזרקור בעמדה Ph3.
היקף היישום: מתאים לצפייה בדגימות שקופות, לא מוכתמות או לא מוכתמות, כגון תאים שונים, רקמות חיות, פרוסות רקמה לא מוכתמות או לא מוכתמות, אורגניזמים מימיים וכו'.
העיקרון הבסיסי של מיקרוסקופ ניגודיות פאזה
כאשר האור עובר דרך דגימה שקופה יחסית, אין שינוי משמעותי באורך הגל (צבע) ובמשרעת (בהירות) של האור. לכן, כאשר צופים בדגימות לא מוכתמות (כגון תאים חיים) תחת מיקרוסקופ אופטי רגיל, לעתים קרובות קשה להבחין במורפולוגיה ובמבנה הפנימי שלהן. עם זאת, בשל ההבדלים במקדם השבירה ובעובי של חלקים שונים בתא, יהיו הבדלים בנתיב האופטי של אור ישיר ומפוזר בעת מעבר דרך דגימה זו. ככל שהנתיב האופטי גדל או יורד, השלב של גלי אור מאיצים או בפיגור ישתנה (כתוצאה מכך הפרש פאזה). הפרש הפאזות של האור לא יכול להיות מורגש בעין בלתי מזוינת, אבל מיקרוסקופ הפרש הפאזות יכול להשתמש במכשיר המיוחד שלו - צמצם עגול וצלחת פאזה, ולהשתמש בתופעת ההפרעות של האור כדי להפוך את הפרש הפאזות של האור להפרש משרעת (הבדל בהיר וחושך) שניתן לזהות על ידי העין האנושית. זה גורם לאובייקט השקוף המקורי להראות הבדלים ברורים של אור וחושך, משפר את הניגודיות, ומאפשר לנו לצפות בבירור בתאים חיים ובמבנים עדינים מסוימים בתוך תאים שלא ניתן לראות או לראות בבירור תחת מיקרוסקופים אופטיים רגילים ומיקרוסקופים של שדה כהה.
עקרון ההדמיה של מיקרוסקופ ניגוד פאזה: המקור האופטי יכול לעבור רק דרך טבעת שקופה של צמצם עגול, אשר לאחר מכן ממוקדת לתוך אלומת אור. כאשר אלומת אור זו עוברת דרך האובייקט הנבדק, היא עוברת דרגות שונות של סטייה (דיפרקציה) עקב הנתיבים האופטיים השונים של כל חלק. בשל העובדה שהתמונה שנוצרת על ידי הטבעת השקופה עולה בקנה אחד עם פני השטח המצומדים על לוחית הפאזה ומישור המוקד מאחורי עדשת האובייקט. לכן, אור ישיר שלא סטה עובר דרך פני השטח המצומדים, בעוד שאור מפוזר שסטה עובר דרך המשטח המפצה. בשל המאפיינים השונים של משטח המצומד ומשטח הפיצוי על לוחית הפאזה, הם ייצרו בהתאמה הבדל פאזה מסוים והפחתת עוצמת האור העובר דרך שני חלקים אלה. לאחר מכן שתי קבוצות האור יתכנסו דרך העדשה האחורית וינועו באותו נתיב אופטי, מה שיגרום להפרעה בין אור ישיר למפוזר, וישנה את הפרש הפאזות להפרש משרעת. בדרך זו, במהלך מיקרוסקופ ניגודיות פאזה, הפרש הפאזות שלא ניתן להבחין בעין האנושית הופך להפרש משרעת (הפרש בהירות) שניתן להבחין בעין האנושית באמצעות אור של גוף שקוף חסר צבע.
