הכנת דגימות ביולוגיות ותצפית באמצעות מיקרוסקופים אלקטרוניים
הרזולוציה של מיקרוסקופ תלויה באורך הגל של האור המשמש. מיקרוסקופ האלקטרונים, שהופיע ב-1933, משתמש באלומות אלקטרונים בעלות אורך גל קצר בהרבה מאור הנראה כמקור האור שלו. זה משפר מאוד את הרזולוציה שלו בהשוואה למיקרוסקופים אופטיים. הבדלים במקורות האור מובילים גם לסדרה של הבחנות בין מיקרוסקופים אלקטרוניים למיקרוסקופים אופטיים.
בהתבסס על הבדלים בעקרונות הדמיית קרן אלקטרונים ובדרכים שבהן הקרן מקיימת אינטראקציה עם דגימות, מיקרוסקופי אלקטרונים מודרניים התפתחו לסוגים רבים. הנפוצים שבהם הם מיקרוסקופי אלקטרונים תמסורת (TEM) ומיקרוסקופים אלקטרונים סורקים (SEM). ההגדלה הכוללת של TEM יכולה לנוע בין פי 1000 ל-1,000,000, בעוד שההגדלה של SEM נעה בין פי 20 ל-300,000. ניסוי זה מציג בעיקר הכנת דגימות עבור מיקרוסקופי אלקטרונים הולכת וסורקים מיקרוסקופים אלקטרונים.
II. מכשיר וחומרים
זַן:Escherichia coliתרבות נטויה
פתרונות וריאגנטים: Formvar, חומצה גופרתית מרוכזת, אתנול אבסולוטי, מים סטריליים, תמיסה מימית של נתרן פוספוטונגסטאט (pH 6.5–8.0), תמיסה פורמלית 0.3% פוליוויניל (מומסת בכלורופורם), ציטוכרום C, אמוניום אצטט, פלסמיד pBR322.
מכשירים ואספקה: מיקרוסקופ אופטי רגיל, רשתות נחושת, משפך בוכנר, כוס, צלחת פטרי, טפטפת סטרילית, מלקחיים סטריליים, מחט לנתח, שקף זכוכית, המוציטומטר, מאייד ואקום, מייבש נקודה קריטית וכו'.
III. נהלי הפעלה
(1) הכנת דגימה ותצפית עבור מיקרוסקופיה אלקטרונית שידור
טיפול ברשתות מתכת דגימות למיקרוסקופיה אופטית נצפו על שקופיות זכוכית. עם זאת, עבור מיקרוסקופ אלקטרונים שידור, אלקטרונים אינם יכולים לחדור לזכוכית, ולכן משתמשים במצעי רשת, הידועים בדרך כלל כרשתות דגימות. רשתות דגימות זמינות במפרטים שונים לפי חומר וצורה. רשתות נחושת של 200-400 mesh הן הנפוצות ביותר. יש לנקות את רשתות הנחושת לפני השימוש כדי להסיר מזהמים, אחרת איכות הסרטים התומכים והבהירות של מיקרוגרפי הדגימות יושפעו. ניסוי זה מאמץ רשתות נחושת בנות 400 רשת, המטופלות באופן הבא: תחילה יש להשרות בתמיסת Formvar למשך מספר שעות, לשטוף שוב ושוב במים מזוקקים, ולאחר מכן לייבש על ידי השרייה באתנול מוחלט. אם הרשתות נשארות מלוכלכות לאחר השלבים שלעיל, השרו אותן בחומצה גופרתית מרוכזת מדוללת (1:1) למשך 1-2 דקות, או הרתיחו אותן בתמיסת NaOH 1% למשך מספר דקות. יש לשטוף היטב במים מזוקקים, לייבש באתנול מוחלט ולהניח בצד לשימוש מאוחר יותר.
