למה אני צריך מיקרוסקופ קונפוקאלי?
1. המיקרוסקופ האופטי השתכלל באמצעות המאמצים והשיפורים של קודמינו הגדולים. למעשה, המיקרוסקופ הרגיל יכול לספק לנו תמונות מיקרוסקופיות יפות בקלות ובמהירות. עם זאת, האירוע שחולל מהפכה בעולם המיקרוסקופים הכמעט מושלמים היה המצאת "המיקרוסקופ הקונפוקאלי הסורק בלייזר". סוג חדש זה של מיקרוסקופ מאופיין במערכת אופטית השואבת מידע תמונה רק מהמשטח עליו מרוכז הפוקוס, ובאמצעות שינוי הפוקוס תוך שחזור המידע הנרכש בזיכרון התמונה, ניתן לקבל תמונה חדה עם מידע מלא 3-ממדי. בדרך זו, ניתן לקבל בקלות מידע על צורת פני השטח שלא ניתן לאשר באמצעות מיקרוסקופ קונבנציונלי. בנוסף, בעוד ש"הגברת הרזולוציה" ו"העמקת עומק המיקוד" הם תנאים סותרים עבור מיקרוסקופים אופטיים קונבנציונליים, במיוחד בהגדלה גבוהה, בעיה זו נפתרת באמצעות מיקרוסקופים קונפוקאליים.
2. היתרונות של מערכת אופטית Confocal
המערכת האופטית הקונפוקלית היא הארה נקודתית של המדגם, בעוד שהאור המוחזר מתקבל גם באמצעות קולטן נקודתי. כאשר הדגימה ממוקמת בנקודת המוקד, כמעט כל האור המוחזר מגיע לפוטו-רצפטור, וכאשר הדגימה לא ממוקדת, האור המוחזר אינו יכול להגיע לפוטו-רצפטור. במילים אחרות, במערכת אופטית קונפוקלית, רק התמונה החופפת לנקודת המוקד מופקת, וכתמים ואור מפוזר חסר תועלת נחסמים.
3. למה להשתמש בלייזר?
במערכת אופטית קונפוקלית, המדגם מואר בנקודה והאור המוחזר נקלט על ידי חיישן נקודתי. לכן יש צורך במקור אור נקודתי. לייזרים הם מקור אור נקודתי מאוד. ברוב המקרים, מקור האור עבור מיקרוסקופים קונפוקאליים הוא מקור אור לייזר. בנוסף, המונוכרומטיות, הכיווניות וצורת האלומה המצוינת של לייזרים הם סיבות חשובות לאימוץ הנרחב שלהם.
4. אפשרית תצפית בזמן אמת המבוססת על סריקה במהירות גבוהה.
עבור סריקת לייזר, נעשה שימוש ביחידת הסטה אופטית אקוסטית (Acoustic Optical Deflector, AO prime) בכיוון האופקי, ובמראה סריקת אלומה מבוקרת סרוו-אלקטרונית (Servo Galvano-mirror) משמשת בכיוון האנכי. מכיוון שאין רטט מכני ב-AO Deflector, סריקה במהירות גבוהה אפשרית ותצפית בזמן אמת על מסך הצג. המהירות הגבוהה של מצלמה זו היא פריט חשוב מאוד שמשפיע ישירות על מהירות המיקוד ושליפת המיקום.
