שיטת ההכנה של שקופיות מיקרוסקופ
1. שיטת מריחה
שיטת מריחה היא שיטה להכנת שקופיות על ידי ציפוי אחיד של חומרים עליהן.
חומרי המריחה כוללים אורגניזמים חד-תאיים, אצות קטנות, דם, חומרי תרבות חיידקים, רקמות רופפות של בעלי חיים וצמחים, אשכים, אנתרים וכו'.
בעת המריחה, יש לשים לב ל:
(1) יש לנקות את מגלשת הזכוכית.
(2) שקף הזכוכית צריך להיות שטוח.
(3) הציפוי חייב להיות אחיד. החל את הטיפה על האמצע הימני של שקף הזכוכית ופזר אותה באופן שווה בעזרת להב לנתח או קיסם.
(4) הציפוי צריך להיות דק. בעזרת שקף זכוכית אחר כמגלשה, דחפו בעדינות מימין לשמאל לאורך פני השקף הזכוכית עם הנוזל המיושם (הזווית בין שתי השקופיות צריכה להיות 30 מעלות עד 45 מעלות), ומרח שכבה דקה אחידה.
(5) תוקן. אם נדרש קיבוע, ניתן להשתמש בקיבוע כימי או בשיטות ייבוש (חיידקים).
(6) מכתים. חיידקים משתמשים במתילן כחול, ודם משתמש בתמיסת צביעה של רייט. תמיסת הצביעה צריכה לכסות את כל משטח הציפוי.
(7) לשטוף. השתמש בנייר סופג לספיגה או ייבוש.
(8) אטום את הסרט. שימור לטווח ארוך באמצעות סרט עץ קנדי.
2. שיטת לחיצת טאבלט
שיטת הדחיסה היא שיטה לחיתוך חומרים ביולוגיים על ידי הנחתם בין שקף זכוכית לכיסוי, תוך הפעלת לחץ מסוים לפיזור תאי רקמה.
התהליך הכללי של שיטת לחיצת הטאבלט:
(1) בחירת חומרים. כדי לצפות בחלוקת תאים, יש לבחור תאי רקמה טריים עם חלוקת תאים נמרצת כחומרים. כגון קצה שורש, מריסטם קצה גזע, תאי מוח עצם, אנתרים (תאי אם אבקה). קני זרע (ספרמטוציטים) וכו'.
(2) תוקן. ניתן לקבוע את קיבוע החומר בהתאם לצרכים, יש לדחוס את הדגימה מיד ולהתבונן. אין צורך לבצע טיפול קיבוע נפרד (סינכרוני עם צביעה); אם החומר אינו נבדק מיד לאחר הדגימה, ניתן לקבע אותו בעזרת מקבע (בדרך כלל מקבע אלכוהול חומצה אצטית). לאחר קיבוע במשך 2-24 שעות (תלוי בחומר), שטפו ב-95% אתנול ואחסנו ב-70% אתנול לשימוש מאוחר יותר.
(3) הפרדה. יש לטפל בחומרים שאינם מתפזרים בקלות על ידי תאים בתמיסת הפרדת הידרוליזה (כגון 1N HCl או זרע של חומצה הידרוכלורית) למשך 6-20 דקות. לאחר הניתוק, יש לשטוף אותם במים לפני הצביעה.
(4) מכתים. ישנם סוגים רבים של צבעים. כרומוזומים נצבעים בדרך כלל בתמיסת צביעת חומצה אצטית מגנטה.
(5) לחץ על הטאבלט. הניחו את החומר על שקף זכוכית, הוסיפו טיפת מים או תמיסת צבע, כסו את השקף בכיסוי ולחץ בעדינות עליו עם האגודל.
(6) התבונן. לאחר הדחיסה, ניתן לראות אותו תחת מיקרוסקופ.
