ההבדל בין מיקרוסקופיה דו-פוטונים למיקרוסקופיה קונפוקלית בלייזר
מיקרוסקופ קונפוקאלי לייזר הוא קבוצה של מערכות תצפית, ניתוח ופלט המשתמשות בלייזר כמקור האור, מצמידות עיקרון מיקוד והתקן על בסיס מיקרוסקופ אופטי מסורתי ועיבוד תמונה דיגיטלית של האובייקט הנצפה באמצעות מחשב. המערכות העיקריות כוללות מקורות אור לייזר, מיקרוסקופים אוטומטיים, מודולי סריקה (כולל ערוצי נתיב אופטי קונפוקאלי וחורים, סריקת מראות, גלאים), מעבדי אותות דיגיטליים, מחשבים והתקני פלט תמונה (מסכים, מדפסות צבעוניות). באמצעות מיקרוסקופ קונפוקאלי סריקת לייזר, ניתן לבצע טומוגרפיה והדמיה של הדגימה הנצפית. לכן, ניתן לצפות ולנתח את המבנה המרחבי התלת מימדי של תאים ללא נזק.
במקביל, מיקרוסקופיה קונפוקלית סריקת לייזר היא גם כלי רב עוצמה לתצפית דינמית של תאים חיים, תיוג אימונופלואורסצנטי מרובה ותיוג קרינת יונים. הוא מנתח במדויק את מהות הספקטרום ומבחין בין אותות מתוויות שונות עם ספקטרום פליטה חופף מאוד.
הדבר החשוב ביותר הוא שלצביעת פלואורסצנטי רב-צבעית, זה יכול לבטל לחלוטין את השפעת הצלבת הקרינה, תוך מזעור אובדן אות הקרינה המדגם. כל אלה הם דברים שמראות רגילות לא יכולות להשיג.
יחסי אורך המוקד בין אובייקטיבי מיקרוסקופ לעינית
עקרונות שונים
1. מיקרוסקופ פלואורסצנטי: הוא משתמש באור אולטרה סגול כמקור אור כדי להאיר את האובייקט הנבדק, מה שגורם לו לפלוט פלואורסצנטי, ולאחר מכן לצפות בצורתו ובמיקום האובייקט מתחת למיקרוסקופ.
2. מיקרוסקופ קונפוקאלי לייזר: על בסיס הדמיית מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, מותקן מכשיר סריקת לייזר לעורר בדיקות פלואורסצנציה באמצעות אור אולטרה סגול או נראה.
מאפיינים שונים
1. מיקרוסקופ פלואורסצנטי: משמש לחקר ספיגה, הובלה, הפצה ולוקליזציה של חומרים בתוך תאים. חלק מהחומרים בתאים, כמו כלורופיל, יכולים לפלוט פלואורסצנטיות לאחר שנחשפו לקרינה אולטרה סגולה; חלק מהחומרים עצמם עשויים שלא לפלוט פלואורסצנטי, אך אם הם מוכתמים בצבעים ניאון או נוגדנים פלואורסצנטיים, הם יכולים גם לפלוט פלואורסצנטיות תחת קרינה אולטרה סגולה.
2. מיקרוסקופ קונפוקאלי לייזר: שימוש במחשב לעיבוד תמונה כדי לקבל תמונות פלואורסצנטיות של המיקרומבנה הפנימי של תאים או רקמות, ולצפייה באותות פיזיולוגיים כגון Ca2+, ערך pH, פוטנציאל ממברנה ושינויים במורפולוגיה של התא ברמה התת-תאית.
