שימוש נכון במיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך
מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך הוא מיקרוסקופ רב תכליתי המשמש בתחום מחקר מדעי ביולוגי מתקדם. המבנה שלו מורכב ויקר. לכן, על מנת שסטודנטים לתואר שני ברפואה יוכלו לתפוס נכון את הפעולה והשימוש במיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך, על המורים להדגים תחילה את הפעולה בפועל של מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך. לפני כן הוקם קורס ללימוד הידע הבסיסי של מיקרוסקופים פלואורסצנטיים הפוכים, הצגת המבנה, העיקרון, התפקוד ושיטות השימוש הבסיסיות של מיקרוסקופים פלואורסצנטיים הפוכים, ולאחר מכן בפעולה הספציפית, לדגימות שונות, להדגים תפקודים שונים, החל מרדודים. לעומק, בהדרגה כדי לתקן את השימוש במיקרוסקופים פלואורסצנטיים הפוכים על ידי סטודנטים לתואר שני ברפואה.
1. שימוש נכון בתצפית בשדה בהיר. אחד מתפקידיו של מיקרוסקופ הקרינה ההפוכה הוא תצפית שדה בהירה. העיקרון הבסיסי הוא שאחרי שהדגימה מוקרנת באור, קליטת האור של כל חלק שונה למימוש הדמיה ברקע בהיר. זה מתאים בעיקר לתאים מוכתמים או צבעוניים, תצפית על דגימות כגון קטעי רקמה.
2. שימוש נכון בתצפית ניגודיות פאזה. הפונקציה השנייה של מיקרוסקופ הקרינה ההפוכה היא תצפית בניגוד פאזה. העיקרון הבסיסי שלו הוא להמיר את הפרש הנתיב האופטי של חלקים שונים של המדגם להפרש משרעת. התצפית מתבצעת באמצעות עדשת אובייקטיבית ניגודית פאזה עם לוחית פאזה ועדשת מעבה עם דיאפרגמה טבעת. זה ישים בעיקר לצפייה בתאים חיים או קטעי רקמה לא מוכתמים, בתהליך של הוראה ניסיונית, בנוסף להנחיה נכונה של סטודנטים לתואר שני ברפואה להתבונן בשיטות הפעולה הבסיסיות של תצפית בניגוד פאזה, חשוב יותר להנחות אותם להבין ולשלוט בדגימות המשמשות לתצפית בניגוד פאזה. עבורם, תצפית מיקרוסקופית של תאים מתורבתים היא הנפוצה ביותר בשימוש במחקר מדעי עתידי. קודם כל, לבחירת ציוד התא, מומלץ בדרך כלל להשתמש בכלי תרבית מזכוכית ופלסטיק, צלחות תרבית ובקבוקי תרבית. רובם חסרי צבע ושקופים, וניתן לצפות בהם ישירות במיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך מבלי לשפוך את נוזל התא וטיפולים אחרים. שנית, במהלך תצפית מיקרוסקופית, אין לפתוח את מכסה הציוד כרצוננו, כדי לא לזהם את התאים. לבסוף, למפעילים, הם צריכים ללבוש כפפות, מסכות ומעילים לבנים, שיכולים לא רק להגן על בריאותם אלא גם למנוע זיהום תאים.
3. שימוש נכון בתצפית הקרינה. הפונקציה השלישית של מיקרוסקופ הקרינה ההפוכה היא תצפית פלואורסצנטיות. העיקרון הבסיסי הוא להשתמש באור עירור כדי לעורר את המדגם כדי ליצור פלואורסצנטי, כדי לממש את התצפית על הצורה והמיקום של המדגם. זה מתאים בעיקר לתצפית על דגימות עם תווית ניאון. תצפית פלואורסצנציה היא פונקציה חשובה של מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך, והאביזרים שלו יקרים ומיוחדים לשימוש. על מנת שסטודנטים לתואר שני ברפואה יוכלו לתפוס נכון את הפעולה והשימוש בתצפית פלואורסצנטית, על המורים לא רק ללמד אותם את שיטות הפעולה הבסיסיות, אלא יותר מכך, ללמד אותם לשלוט בייחודיותה. קודם כל, בהכנת דגימות, זכוכית השקופית וזכוכית הכיסוי צריכים להיות בעלי משטח חלק ועובי מתאים (זכוכית השקופית צריכה להיות בין 0.8 מ"מ ל-1.2 מ"מ, וזכוכית הכיסוי צריכה להיות בערך 0. {5}}.17 מ"מ); הדגימה צריכה להיות בעלת עובי מתאים ולהימנע מתאים מחפיפה או מיסוך על ידי זיהומים; על המדיום להרכבה להשתמש בתערובת בנפח שווה של גליצרול ומאגר קרבונט (0.5mol/L pH9.0-9.5). שנית, לפני תצפית פלורסנט, יש לכבות את האור החשמלי בחדר ואת האור הלבן של מיקרוסקופ הפלורסנט ההפוך כדי להבטיח את הסביבה בחדר חשוך. לבסוף, בתצפית הקרינה, יש לשלוט בקפדנות על זמן התצפית, בדרך כלל מתאימים 1-2 שעות/זמן, אחרת הקרינה תיחלש ותיעלם; בעת התאמת מקור האור, הרכיב משקפי מגן כדי למנוע נזק של קרניים אולטרה סגולות למשקפיים.
4. שימוש נכון בצילום תמונה. במחקר מדעי, זה לא רק נדרש שמיקרוסקופ הקרינה ההפוכה יוכל לממש תצפיות שונות, אלא גם דורש שמיקרוסקופ הקרינה ההפוכה יוכל לממש לכידת תמונה. מערכת מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך משלבת מיקרוסקופ אופטי עם מחשב באמצעות המרה פוטו-אלקטרית, לא רק לצפייה מיקרוסקופית על העינית, אלא גם לתצפית דינמית בזמן אמת, עריכה ושמירה במחשב.
