כמה אתה יודע על מיקרוסקופיה פלואורסצנטית
מיקרוסקופים פלואורסצנטיים משתמשים בדרך כלל במנורות כספית בעוצמה גבוהה כמקורות אור עירור. מסננים משמשים לסינון אור לא רצוי, ומשאירים רק את האור הטהור בעוצמה גבוהה שמלהיב את הפלואורפור. לאחר שהאור המונוכרומטי מקרין את הדגימה דרך עדשת האובייקטיב, הדגימה תתרגש לפלוט אור (פלורסנטיות), וגם הקרינה וגם אור העירור יחזרו לאורך הנתיב האופטי של עדשת האובייקט. במקרה זה, נדרשת מראה דיכרואית כדי לסנן את אור העירור. , נותן רק את הקרינה שאנחנו צריכים לראות דרך.
הקרינה הזו מגיעה לעינית לאורך נתיב האור של המיקרוסקופ, ואז נכנסת לעינינו, שם נוכל לראות את הקרינה הנפלטת מהפלואורופור.
בדיקה והתאמה מראש של מיקרוסקופ הקרינה:
(1) לפני כל תצפית הקרינה, יש צורך לבדוק באופן שגרתי את יישור החוטים, מיקוד הנתיב האופטי, דיאפרגמת הצמצם וסרעפת השדה של מכשיר הקרינה.
(2) האם מכלול מסנן עירור/פליטה של הקרינה הנדרשת הותקן בממיר, האם עדשת האובייקטיב של מיקרוסקופ הקרינה מוגדרת כהלכה, והסר את כתמי השמן והאבק בעדשה הקדמית של עדשת האובייקטיב.
(3) אם מתבצעת במקביל תצפית ניגודיות פאזה של אור משודר, יש צורך לבדוק את הצימוד של מרכז המעבה וטבעת ניגוד הפאזה מול עדשת האובייקט.
(4) בדוק אם מנשא הדוגמאות (זכוכית שקופיות, זכוכית כיסוי וכלים אחרים) מכוסה בנוזל או באבק, והאם העובי נמצא בטווח מרחק העבודה המכויל של עדשת האובייקטיב. המדגם הפרוס לא צריך להיות עבה מדי, רצוי פחות או שווה ל-10 מיקרומטר.
(5) מכיוון שמקור התאורה מכיל קרניים אולטרה סגולות, לוחית מגן אור חומה מונחת מעל קדמת הבמה כדי למנוע מקרניים אולטרה סגולות לפגוע ברשתית.
(6) אי יציבות מתח תפחית את חיי השירות של מנורת הכספית בלחץ גבוה, ואספקת הכוח של מקור האור מצוידת במייצב מתח.
(7) על מנת להאריך את חיי מנורת הכספית, ניתן לכבות אותה 15 דקות לאחר הדלקתה; לאחר כיבוי כוח הפלורסנט של מנורת הכספית, עליה להמתין לפחות 10 דקות כדי להפעיל מחדש את אדי הכספית כדי להתקרר ולחזור למצב המקורי, אחרת חיי המנורה יושפעו.
תצפית תמונה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי:
(1) כ-5-10 דקות לאחר הפעלת מקור האור הפלורסנטי, עוצמת אור העירור נוטה להיות יציבה, והדגימה נטענת לתצפית; על מנת למנוע את כיבוי הקרינה של הדגימה הנגרמת על ידי אור עירור מוגזם בתהליך של מיקוד וחיפוש אובייקטים, תחילה הקטנת מיקרוסקופ הקרינה התאם את אור העירור לעוצמה מתונה עם דיאפרגמת צמצם או הוסף מסנן ND, ו להעביר את שלב הדגימה באופן קבוע. לאחר אישור תמונת המראה, התאם למצב הפלורסנט לצורך צילום והקלטה.
(2) התאמות לאיכות תמונה ירודה. בנוסף לגורמי הכנה לדוגמה, ההתאמות הנחוצות שניתן לבצע הן:
① אל תכלול התקנים מגני אור או מגבילי אור בנתיב האופטי של ההדמיה, כגון אביזרי DIC, מסנני ND וכו'.
②כוונן מחדש את מיקוד המקלט ואת גודל דיאפרגמת הצמצם של מיקרוסקופ הקרינה.
③ התאם בזהירות את טבעת תיקון הפרש הכיסוי של עדשת האובייקטיב של מיקרוסקופ הקרינה.
נקודות יישום של מיקרוסקופ פלואורסצנטי
מיקרוסקופ פלואורסצנטי משתמש בהדמיית "פלואורסצנטי אקטינית". אם אורך גל העירור שנבחר הוא באזור האולטרה-סגול הקרוב (320-400nm), שאינו נראה לעין בלתי מזוינת, ספקטרום הפליטה של הקרינה גם הוא קצר יותר מאורך הגל הממוצע של מקורות אור רגילים במראה אור. לְשַׁפֵּר. פוטונים בעלי אנרגיה גבוהה מתנגשים באלקטרונים, מה שגורם לאלקטרונים לעבור ממצב הקרקע למצב הנרגש. האלקטרונים במצב הנרגש הם מאוד לא יציבים ויחזרו למצב הקרקע. בתהליך זה ייצרך חלק מהאנרגיה התרמית ופוטונים חדשים ייפלטו. לפוטון החדש יש אנרגיה נמוכה יותר מהפוטון המקורי ולכן יש לו אורך גל ארוך יותר. מכיוון שאורך הגל הפוטון החדש שונה מאורך הגל הפוטון של האור הנוצר, שתי אלומות האור בעלות אורכי גל שונים מופרדות בשיטת עיבוד אופטית מסוימת, כך שאנו רואים רק את הפוטונים החדשים הנפלטים (אות פלואורסצנטי), כלומר, מיקרוסקופ הקרינה רואה תמונות פלואורסצנטיות.
