כיצד מיקרוסקופיה פלואורסצנטית שונה ממיקרוסקופיה לייזר קונפוקלית
מיקרוסקופ פלואורסצנטי
1. מיקרוסקופ פלואורסצנטי משתמש באור אולטרה סגול כמקור אור כדי להאיר את האובייקט הנבדק כדי לגרום לו לפלוט פלואורסצנטי, ולאחר מכן לצפות בצורתו ובמיקום האובייקט מתחת למיקרוסקופ. מיקרוסקופ פלואורסצנטי משמש לחקר הספיגה וההובלה של חומרים בתוך תאים, כמו גם הפצה ומיקום של חומרים כימיים. חלק מהחומרים בתאים, כמו כלורופיל, יכולים להאיר לאחר הקרנות אולטרה סגולות; חלק מהחומרים עצמם אינם יכולים להאיר, אך אם הם מוכתמים בצבעים ניאון או בנוגדנים פלואורסצנטיים, הם יכולים להאיר לאחר הקרנה בקרניים אולטרה סגולות. מיקרוסקופ פלואורסצנטי הוא אחד הכלים למחקר איכותני וכמותי על חומרים כאלה.
2. עקרון מיקרוסקופ פלואורסצנטי:
(א) מקור אור: מקור האור מקרין אור באורכי גל שונים (מאולטרה סגול ועד אינפרא אדום).
(ב) מקור אור מסנן עירור: מעביר אור באורך גל מסוים שיכול לגרום לדגימה להאיר, תוך חסימת אור שאין בו תועלת לגירוי הקרינה.
(ג) דגימות פלורסנט: מוכתמות בדרך כלל בפיגמנטים ניאון.
(ד) מסנן חוסם: חוסם את אור העירור שאינו נספג בדגימה ומשדר פלואורסצנטי באופן סלקטיבי. כמה אורכי גל בקרינה מועברים גם הם באופן סלקטיבי. מיקרוסקופ המשתמש באור אולטרה סגול כמקור אור כדי לגרום לאובייקט המואר להקרין. מיקרוסקופ האלקטרונים הורכב לראשונה בשנת 1931 בברלין, גרמניה על ידי קנור והאלוסקה. מיקרוסקופ זה משתמש בקרן אלקטרונים במהירות גבוהה במקום בקרן אור. מכיוון שאורך הגל של זרימת האלקטרונים קצר בהרבה מזה של האור, ההגדלה של מיקרוסקופ האלקטרונים יכולה להגיע פי 800,000 ומגבלת הרזולוציה המינימלית היא 0.2 ננומטר. מיקרוסקופ האלקטרונים הסורק, שהחל בשימוש ב-1963, מאפשר לאנשים לראות את המבנים הזעירים על פני השטח של עצמים.
3. היקף יישום: משמש להגדלת תמונות של אובייקטים קטנים. משמש בדרך כלל בתצפית על ביולוגיה, רפואה, חלקיקים מיקרוסקופיים וכו'.
מיקרוסקופ קונפוקאלי
1. המיקרוסקופ הקונפוקאלי מוסיף לנתיב האופטי של האור המוחזר עדשה חצי רפלקטיבית למחצה, השוברת את האור המוחזר שעבר בעדשה לכיוונים אחרים. ישנו חור עם חור חריר במוקד שלו, והחור ממוקם בנקודת המוקד, מאחורי ה-Baffle, הוא צינור photomultiplier. ניתן לדמיין שהאור המוחזר לפני ואחרי מוקד אור הזיהוי עובר דרך מערכת קונפוקלית זו ולא ניתן למקד אותו בחור הקטן, ויחסום על ידי הבלאט. אז מה שהפוטומטר מודד הוא עוצמת האור המוחזר במוקד.
2. עיקרון: מיקרוסקופים אופטיים מסורתיים משתמשים במקורות אור שדה, והתמונה של כל נקודה בדגימה תופרע על ידי עקיפה או אור מפוזר מנקודות סמוכות; מיקרוסקופים קונפוקאליים לסריקת לייזר משתמשים בקרני לייזר כדי ליצור מקורות אור נקודתיים דרך חורים מאירים כדי להאיר את פנים הדגימה. כל נקודה של מישור המוקד נסרקת, והנקודה המוארת על הדגימה מצטלמת בחריר הזיהוי, הנקלט נקודה אחר נקודה או שורה אחר שורה על ידי צינור מכפיל הפוטו (PMT) או התקן צימוד קר (cCCD) מאחורי הזיהוי חריר, והוא במהירות תמונה ניאון נוצרת על מסך צג המחשב. חריר ההארה וחור הזיהוי מצומדים ביחס למישור המוקד של עדשת האובייקט. נקודות במישור המוקד ממוקדות בחריר ההארה ובחור הפליטה בו זמנית. נקודות מחוץ למישור המוקד לא יצולמו בחריר הזיהוי. זה מתקבל תמונות Confocal הן חתכים אופטיים של דגימות, מתגברות על החסרונות של תמונות מטושטשות במיקרוסקופים רגילים.
3. תחומי יישום: הכוללים רפואה, מחקר מדעי של בעלי חיים וצמחים, ביוכימיה, בקטריולוגיה, ביולוגיה של תאים, אמבריולוגיה של רקמות, מדעי המזון, גנטיקה, פרמקולוגיה, פיזיולוגיה, אופטיקה, פתולוגיה, בוטניקה, מדעי המוח, ביולוגיה ימית ומדעי החומרים, מדע אלקטרוני , מכניקה, גיאולוגיה של נפט, מינרלוגיה.
