תצפית פלואורסצנטית של מיקרוסקופ אופטי
פלואורסצנטי מתייחס לתהליך שבו חומר ניאון פולט אור עם אורך גל ארוך יותר כמעט בו זמנית כאשר הוא מוקרן באור באורך גל מסוים (איור 1). כאשר אור באורך גל מסוים (אורך גל עירור) פוגע במולקולה, כמו אלו הנמצאות בפלוורופור, אנרגיית הפוטון נספגת באלקטרונים של המולקולה. לאחר מכן, האלקטרונים עוברים ממצב הקרקע (S0) לרמת אנרגיה גבוהה יותר, המצב הנרגש (S1'). תהליך זה נקרא עירור①. האלקטרון נשאר במצב הנרגש למשך 10-9–10-8 שניות, שבמהלכן האלקטרון מאבד מעט אנרגיה②. במהלך תהליך עזיבת האלקטרונים את המצב הנרגש (S1) וחוזרים למצב הקרקע③, משתחררת האנרגיה הנותרת הנספגת במהלך תהליך העירור.
תרשים יבלונסקי פלורסנט
זמן השהייה של מולקולת הפלורסנט במצב הנרגש הוא משך חיי הקרינה, שהוא בדרך כלל ברמה של ננו-שניות, והוא מאפיין אינהרנטי של מולקולת הפלורסנט עצמה. Fluorescence Lifetime Imaging (FLIM), המשתמשת בטכנולוגיית הדמיית פלואורסצנציה לכל החיים, יכולה לבצע מדידות פונקציונליות מעמיקות יותר בנוסף להדמיית עוצמת הקרינה, ולקבל קונפורמציה מולקולרית, אינטראקציות בין-מולקולריות ומיקרו-סביבה של מולקולות וכו'. מידע שקשה לבצע להשיג עם הדמיה אופטית קונבנציונלית.
תכונה חשובה נוספת של הקרינה היא הסטוק סטוקס, ההבדל באורך הגל בין שיאי העירור והפליטה (איור 2). בדרך כלל אורך הגל הפליטה ארוך מאורך גל העירור. הסיבה לכך היא שהאלקטרונים יאבדו חלק מהאנרגיה שלהם בתהליך הרפיה לאחר התרגשות החומר הפלורסנטי ולפני שחרור פוטונים. קל יותר לראות חומרים פלואורסצנטיים עם תזוזות סטוקס גדולות יותר תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
מיקרוסקופ פלואורסצנטי
מיקרוסקופ פלואורסצנטי הוא מיקרוסקופ אופטי העושה שימוש בתכונות פלואורסצנטיות לצורך תצפית והדמיה, ונמצא בשימוש נרחב בתחומים שונים כגון ביולוגיה של התא, נוירוביולוגיה, בוטניקה, מיקרוביולוגיה, פתולוגיה וגנטיקה. להדמיית פלואורסצנציה יתרונות של רגישות גבוהה וסגוליות גבוהה, והיא מתאימה מאוד לצפייה בהתפלגות של חלבונים ואברונים ספציפיים ברקמות ובתאים, חקר הקולקליזציה והאינטראקציה, מעקב אחר תהליכים דינמיים בחיים כמו שינויים בריכוז היונים. , וכו.
רוב המולקולות בתאים אינן מקרינות, ואם אתה רוצה לראות אותן, אתה מתייג אותן בצורה פלואורסצנטית. ישנן שיטות רבות של תיוג ניאון, כגון תיוג ישיר (כגון שימוש ב-DAPI לתיוג DNA), או צביעה חיסונית באמצעות תכונות קושרות האנטיגן של נוגדנים, או שימוש בחלבונים ניאון (כגון GFP, חלבון פלואורסצנטי ירוק) כדי לסמן חלבוני מטרה , וכריכה הפיכה. צבעים סינתטיים (כגון Fura-2) וכו'.
מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך MF53-N
כיום, מיקרוסקופ הקרינה הפך לציוד ההדמיה הסטנדרטי של מעבדות ופלטפורמות הדמיה שונות, והוא עוזר טוב לניסויים היומיומיים שלנו. מיקרוסקופי פלואורסצנטי מחולקים בעיקר לשלוש קטגוריות: מיקרוסקופים פלואורסצנטיים זקופים (מתאימים לחיתוך), מיקרוסקופים פלואורסצנטיים הפוכים (מתאימים לתאים חיים, תוך התחשבות בחיתוך), סטריאוסקופים פלואורסצנטיים (מתאימים לדגימות גדולות יותר, כגון צמחים, דג זברה (בוגר/עובר). ) , מדקה, איברי עכבר/עכברושים וכו').
טכנולוגיית הדמיית מיקרוסקופיה פלואורסצנטית נמצאת בשימוש נרחב ועשירה בסוגים, וטכנולוגיות חדשות עדיין צצות. אתה יכול לבחור את הטכנולוגיה כדי להשלים את המחקר שלך.
