פרמטרים טכניים של מיקרוסקופ פלואורסצנטי טכניקות ושיטות של מיקרוסקופ פלואורסצנטי
פרמטרים טכניים של מיקרוסקופ פלואורסצנטי 1. עינית זווית רחבה 2. עדשת אובייקטיבית אכרומטית 3. ממיר עדשת אובייקטיבית עם ארבעה חורים 4. מכשיר אפי-פלורסנט כחול (B) ירוק (G) מערכת עירור 10מנורת כספית 0W 5. מנגנון התאמת פוקוס גס ועדין קואקסיאלי: התאמה טווח מיקוד: 15 מ"מ ערך רשת מיקרו-תנועה: 0.002 מ"מ 6. שולחן מכאני דו-שכבתי טווח תנועה אורכי: 70 מ"מ טווח תנועה לרוחב: 50 מ"מ
פרמטרים טכניים של מיקרוסקופ פלואורסצנטי
1. עינית בעלת זווית רחבה
2. עדשת אובייקטיבית אכרומטית
3. חוטם עם ארבעה פתחים
4. מכשיר אפי פלואורסצנטי כחול (B) ירוק (G) מערכת עירור 100W מנורת כספית
5. מנגנון כוונון מיקוד גס ועדין קואקסיאלי: טווח מיקוד 15 מ"מ ערך רשת תנועה עדינה 0.002 מ"מ
6. שולחן עבודה מכני דו-שכבתי
טווח תנועה אנכי: 70 מ"מ טווח תנועה לרוחב: 50 מ"מ
מיומנויות ושיטות של מיקרוסקופ פלואורסצנטי
(1) שקף זכוכית
עובי שקף הזכוכית צריך להיות בין 0.8 ל-1.2 מ"מ. שקופית עבה מדי תספוג יותר אור מצד אחד, ומצד שני לא ניתן לרכז את אור העירור בדגימה. השקופיות חייבות להיות חלקות, בעובי אחיד וללא אוטופלואורסצנטי ברור. לפעמים נעשה שימוש בשקופיות זכוכית קוורץ.
(2) זכוכית מכסה
עובי זכוכית הכיסוי הוא כ-0.17 מ"מ, חלק. על מנת לחזק את אור העירור, ניתן להשתמש גם בזכוכית כיסוי הפרעה, שהיא זכוכית כיסוי מיוחדת המצופה במספר שכבות של חומרים (כגון מגנזיום פלואוריד) בעלי השפעות הפרעות שונות על אור באורכי גל שונים, מה שיכול להפוך את הקרינה עוברת בצורה חלקה. אור מרגש עובר דרכו ומוחזר, ואור עירור מוחזר זה מרגש את הדגימה.
(3) דגימה
פרוסות רקמה או דגימות אחרות לא צריכות להיות עבות מדי. אם הוא עבה מדי, רוב אור העירור נצרך בחלק התחתון של הדגימה, בעוד שהחלק העליון הנצפה ישירות על ידי עדשת המטרה לא יתרגש במלואו. בנוסף, חפיפת תאים או כיסוי טומאה, משפיעים על השיפוט.
(4) סוכן הרכבה
גליצרין משמש בדרך כלל כחומר הרכבה, שאסור לו להיות בעל פלואורסצנטי אוטומטי, חסר צבע ושקוף, והבהירות של הקרינה בהירה יותר ב-pH 8.5-9.5, ולא קל לדהות במהירות. לכן, תערובת שווה של גליצרול ו-0.5mol/l תמיסת חיץ קרבונט עם pH של 9.0 עד 9.5 משמשת בדרך כלל כחומר הרכבה.
(5) שמן מראה
בדרך כלל, בעת התבוננות בדגימות עם מיקרוסקופי פלואורסצנטי בשדה כהה ועדשות טבילה בשמן, יש להשתמש בשמן טבילה. עדיף להשתמש בשמן טבילה מיוחד שאינו פלואורסצנטי. ניתן להשתמש גם בגליצרין הנ"ל במקום, וניתן להשתמש גם בפרפין נוזלי, אך מקדם השבירה נמוך, מה שיש לו השפעה קלה על איכות התמונה. לְהַשְׁפִּיעַ.
העיקרון והמאפיינים המבניים של מיקרוסקופ פלואורסצנטי
מיקרוסקופיה פלואורסצנטית משתמשת בנקודה בעלת יעילות אור גבוהה כדי לפלוט אור באורך גל מסוים (כגון אור אולטרה סגול 3650 אינץ' או אור כחול סגול 4200 אינץ') דרך מערכת המסנן כאור העירור כדי לעורר את החומרים הפלורסנטים בדגימה כדי לפלוט פלואורסצנציה של צבעים שונים לאחר מכן, התבונן באמצעות הגדלה של עדשת האובייקט והעינית. בצורה זו, ברקע ניגודיות חזקה, גם אם הקרינה חלשה מאוד, קל לזהות אותה ובעלת רגישות גבוהה. הוא משמש בעיקר למחקר של מבנה ותפקוד התא והרכב כימי. המבנה הבסיסי של מיקרוסקופ פלואורסצנטי מורכב ממיקרוסקופ אופטי רגיל בתוספת כמה אביזרים (כגון מקור אור ניאון, מסנן עירור, מפצל אלומה דו-צבעוני ומסנן חוסם וכו'). מקור אור ניאון - בדרך כלל השתמש במנורת כספית בלחץ גבוה במיוחד (50-200W), שיכולה לפלוט אור באורכי גל שונים, אבל לכל חומר ניאון יש אורך גל עירור שמייצר את הקרינה החזקה ביותר, ולכן מסנן עירור (בדרך כלל, ישנם מסנני עירור אולטרה סגול, סגול, כחול וירוק), המאפשרים רק לאור עירור באורך גל מסוים לעבור ולהקרין את הדגימה, תוך כדי קליטת אור אחר. לאחר שכל חומר מוקרן באור עירור, הוא פולט פלואורסצנטיות גלוי עם אורך גל ארוך יותר מאורך הגל של הקרינה תוך זמן קצר מאוד. הקרינה היא ספציפית ובדרך כלל חלשה יותר מאור עירור. על מנת לצפות בקרינה ספציפית, יש להוסיף חסימה (או דיכוי) מאחורי עדשת האובייקטיב ולהשתמש בה יחד איתה.
ההבדל בין מיקרוסקופ פלואורסצנטי למיקרוסקופ רגיל
1. שיטת ההארה היא בדרך כלל אפיסקופית, כלומר מקור האור מוקרן על המדגם דרך עדשת האובייקטיב;
2. מקור האור הוא אור אולטרה סגול, אורך הגל קצר יותר והרזולוציה גבוהה מזו של מיקרוסקופים רגילים;
3. ישנם שני פילטרים מיוחדים, זה שלפני מקור האור משמש לסינון האור הנראה, וזה שבין העינית לעדשת האובייקטיב משמש לסינון קרניים אולטרה סגולות להגנה על העין האנושית.
מיקרוסקופ פלואורסצנטי הוא גם סוג של מיקרוסקופ אופטי, ההבדל העיקרי הוא שאורך גל העירור של השניים שונה. זה קובע את ההבדל בין מיקרוסקופ פלואורסצנטי למיקרוסקופ אופטי רגיל מבחינת מבנה ושימוש.
מיקרוסקופ פלואורסצנטי הוא כלי חיוני בציטוכימיה אימונופלואורסנטית. הוא מורכב ממרכיבים עיקריים כגון מקור אור, מערכת לוחות סינון ומערכת אופטית. זה להשתמש באורך גל מסוים של אור כדי לעורר את הדגימה כדי לפלוט פלואורסצנטי, ולצפות בתמונת הקרינה של הדגימה על ידי הגברה של עדשת האובייקט והעינית.
