מיקרוסקופיה ביולוגית על נפח גושי הרקמה
ביומיקרוסקופיה עד כה, קיבוע קר כקרח, קטעים דקים במיוחד קפואים ומניפולציה יבשה קפואה הם שיטות שגרתיות למיקרו שדות רנטגן של רקמות ותאים. פרטי השיטה מוסברים בנקודות הבאות:
מיקרוסקופים ביולוגיים ניתן להזיז מיקרוסקופים עם עדשת מעבה למעלה ולמטה כדי להשיג בהירות מתונה, או לשנות את הצמצם של מרחיב האור המשתנה כדי להשיג בהירות מתונה של 9b. אם האור הוא שטוף שמש, ניתן להגדיל את היקף האיתור כראוי, ולהגדיל את הצמצם של האור המשתנה כראוי. אם האור חזק מדי, אז מראת הזרקורים יכולה להיות מתאימה למטה, את הצמצם של קפיצת האור המשתנה להפחתה מתאימה. אם במקרה זה עדיין מרגיש מסנוור, אז אתה יכול לבחור את המסנן המתאים המוצב בסוגר מתחת לזרקור. ניתן להשיג זאת כדי להפוך אותך מרוצה מהבהירות. כמובן, בהתאמת המצבים העליונים והתחתונים של עדשת הקבל יכול לשנות את גודל הצמצם של קריאת האור ובחירת המסננים המתאימים, כלומר לאחר תקופה מסוימת של תרגול והתנסות.
מיקרוסקופ ביולוגי נושא חשוב מאוד הוא בתהליך הדגימה וההפרדה של תאים, ייבוש בהקפאה והטבעת שרף (FD) לאחר הקפאת חוברות אולטרה, ייבוש בהקפאה לאחר ריצה עדינה של כל חלק מתוכן הרכב 65 היסודות חייב להיות מטופל בזהירות רבה, ואסור לפגוע בתאים שיש לצפות ולנתח. מכיוון שניתוח מיקרו-אזור רנטגן הוא לא רק שלבים רבים, והעלות היא גבוהה מאוד, אם לאחר זמן רב ושלבי עיבוד מרובים, התאים המנותחים הם תאים פגומים או תאים מתים, כדי להסיק את המסקנות השגויות מצער מאוד. לדוגמה, לקרדיומיוציטים שבודדו בטיפול בקולגנאז יש שתי מורפולוגיות, האחת בצורת מוט ארוך והשנייה עגולה. האחרונים הם תאים גוססים שנפגעו במהלך בידוד התאים.
ביומיקרוסקופיה התוכן וההפצה של אלקטרוליטים בשני סוגי תאים אלה שונים מאוד. Na היה גבוה מאוד ו-K נמוך מאוד בקרדיומיוציטים העגולים, וריכוז ca היה גבוה מאוד במיטוכונדריה. לאחר בדיקה בשיטות אנליטיות אחרות, הוכח שה-Na הגבוה וה-K הנמוך בתאים העגולים וה-ca הגבוה במיטוכונדריה היו תוצאה של פגיעה בממברנת התא במהלך הפרדת התאים. קיבוע קר של תאים ורקמות נעשה לרוב על ידי קיבוע מרווה ואחריו שימור בחנקן נוזלי. קיבוע מרווה חשוב ליעילות השימור. תאים חיים או רקמות טריות עשירות במים, כאשר הכיבוי הוא לעתים קרובות התאים או הרקמות והגורם הקור (במיוחד עם חנקן נוזלי קור טהור) מגע ישיר עם החלקים של קיבוע ההקפאה הראשון, ובכך יוצרים "קליפה", אשר מונע את קיבוע הקור של מרכז התא. כתוצאה מכך, גבישי קרח נמצאים לעתים קרובות במרכזם של תאים גדולים יותר במהלך ניתוח מיקרו-תאי רנטגן. על מנת למנוע זאת, משתמשים בחומרים עם נקודת התכה גבוהה מחנקן נוזלי אך נמוכה מ-806c יבש כחומרי קירור. יש הרבה חומרים כאלה, אבל * קל להשגה, לא יקר הוא פרופאן מרוכז (נקודת רתיחה של 42.120c, נקודת התכה של 187.10c, משקל מולקולרי של 44.1), קצב הקירור * מהיר. עם זאת, יש לו את החיסרון להיות דליק.
ניתן למקם מיקרוסקופ ביולוגי על סיבי שריר מדף מיוחד, כך שצריך לתקן את התכווצות סיבי השריר כדי להגיע לשלב זמן מסוים, הפעל מיד את הזרבובית, כך שהפרופן הנוזלי יגיע לסילון סיבי השריר, כך שהכיבוי של הקור תיקן. לאחר מכן מוציאים את סיב השריר יחד עם המתלה ומכניסים לחנקן נוזלי. אם תיקון תאי דם או תאים מבודדים, תחילה צנטריפוגה במהירות נמוכה כדי להפוך את התאים מרוכזים, התאים יועברו מוליכות תרמית טובה של צינור הכסף, הצינור לתוך פגר נוזלי פרופאן קבוע קר. מעבדת הול תיקנה לבלב חולדה, שתי חתיכות הפלדה הראשונות עם הליום נוזלי (או חנקן נוזלי) קירור מקדים, עם מהדק מהודק שתי חתיכות הנחושת יונחו לפני ומאחורי הלבלב, כך שהדודה של קיבוע קור מרווה בלוטות. ניתן לאחסן רקמות או תאים בחנקן נוזלי במשך זמן רב לאחר כיבוי וקיבוע.
