מבנה בסיסי של מיקרוסקופיה פלואורסצנטית קונפוקלית
(1) מודול סריקה
מודול הסריקה מורכב בעיקר מפס אור חריר (השולט בעובי של פרוסות אופטיות), ספקטרוסקופ (שינוי כיוון התפשטות האור לפי אורך הגל), קולורימטר פלואורסצנטי פליטה (בוחר אור בטווח אורך גל מסוים לזיהוי), וכן גלאי (שפופרת פוטו-מכפיל). הקרינה המעורבת בדגימת הפלורסנט נכנסת לסורק, ולאחר שנבחרה על ידי פס האור, הספקטרומטר והקולורימטר לזיהוי חריר, היא מחולקת לקרינה מונוכרומטית שונות, המתגלות בערוצי פלואורסצנטי שונים ויוצרות תמונות קונפוקאליות מתאימות. במקביל, ניתן להציג על מסך המחשב מספר תמונות פלואורסצנטי מונוכרומטיות מקבילות והתמונות המרוכבות שלהן.
(2) מערכת מיקרוסקופיה פלואורסצנטית
מיקרוסקופ הוא המרכיב העיקרי של LSCM, הקשור לאיכות ההדמיה של המערכת. ניתן להכניס בקלות את הנתיב האופטי של המיקרוסקופ למערכת אופטית מרוחקת לאין שיעור עם אפשרויות אופטיות מבלי להשפיע על איכות ההדמיה ודיוק המדידה. המטרה צריכה להיות מטרה אפוכרומטית בשדה שטוח עם צמצם מספרי גדול, המועילה לרכישת הקרינה והדמיה ברורה. ההמרה של קבוצת עדשות האובייקטיב, בחירת קבוצת מסנני הצבע, התאמת תנועה של הבמה ונעילת זיכרון של מישור המוקד צריכים כולם להיות נשלטים אוטומטית על ידי המחשב.
מיקרוסקופ הקרינה המשמש במיקרוסקופ קונפוקאלי סריקת לייזר זהה בדרך כלל למיקרוסקופ פלואורסצנטי רגיל, אך יש לו מאפיינים משלו: יש לחבר אותו לסורק, כדי שהלייזר יוכל להיכנס לאובייקט המיקרוסקופ כדי להקרין את הדגימה וליצור הקרינה הנפלטת מהדגימה מגיעה לגלאי; נדרש מכשיר להמרת נתיב אור, הממיר מנורות כספית ללייזרים, וניתן לכוון את עוצמת האור של מנורת הכספית.
(3) לייזרים נפוצים
מקורות הלייזר המשמשים במיקרוסקופיה קונפוקלית של סריקת לייזר כוללים מערכות לייזר יחיד ורב לייזר, והלייזרים הנפוצים כוללים את שלושת הסוגים הבאים:
לייזר מוליכים למחצה: 405 ננומטר (קרוב לקו ספקטרלי אולטרה סגול)
לייזר יוני ארגון: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (אור ירוק כחול)
He-Ne לייזר: 543nm (אור ירוק He-Ne לייזר ירוק) 633nm (אור אדום He-Ne לייזר אדום)
לייזר UV (לייזר UV): 351 ננומטר, 364 ננומטר (אור UV)
(4) ציוד עזר
מערכות קירור מקוררות באוויר, מקוררות מים וספקי כוח מוסדרים.
עקרון העבודה הבסיסי של מיקרוסקופ קונפוקאלי סורק לייזר הוא לפלוט תחילה אורך גל מסוים של אור עירור מהלייזר. לאחר ההגברה, האור עובר דרך פס האור המואר בסורק ליצירת מקור אור נקודתי. עדשת האובייקטיבית מתמקדת במישור המוקד של הדגימה, והנקודות המוארות המתאימות בדגימה מתרגשות ופולטות פלואורסצנטיות. לאחר שעבר דרך פס האור של חור הזיהוי, הוא מגיע לגלאי ומצולם על מסך הניטור של המחשב. בדרך זו, תמונה קונפוקלית מלאה נוצרת על ידי תמונות הקרינה של כל נקודה של הדגימה במישור המוקד, הנקראת פרוסה קלה.
